AdeptTect Speed HS PCR Master Mix ( dye plus ) Ⅱ 是适用于快速 PCR 反应的 2 倍浓度预混型制品，具有延伸速度快（15sec/kb）、扩增效率高、退火效率高等特点，适合扩增长 DNA 片段及复杂结构的 DNA 片段。使用时只需要在溶液中加入模板、引物和水即可进行 PCR 反应；同时本制品中还加入了电泳检测时所需的色素试剂，制品呈现紫红色，PCR 反应完毕后可以直接进行琼脂糖凝胶电泳；操作便捷，可最大限度地减少人为误差，并在较短时间内可获得检测结果。此外，本制品中还添加了在常温状态下能够抑制 DNA Polymerase 活性的单克隆抗体，可以进行 Hot Start PCR，有效抑制引物二聚体的形成及非特异性扩增。
本制品扩增得到的产物 3’ 端不含 A 碱基，因此不可直接用于 TA 克隆。
产品优势
① 本制品具有较快的延伸速度（可达15sec / kb），可在较短时间内获得检测结果。
② 本制品为 2X 预混液，加入模板、引物和水即可进行 PCR 反应，操作简便，可最大限度地减少人为误差，大大提高了实验效率。
③ 本制品中含有紫红色染料，PCR 结束后可直接进行琼脂糖凝胶电泳，无需添加电泳上样缓冲液，电泳时有一条浅紫红色指示带。
④ 适合长片段的扩增，以 Human gDNA 为模板，可扩增出 30kb 的 DNA 片段。
⑤ 适合扩增复杂 DNA 片段，如高 GC 的 DNA 片段。
产品组成
组分
规格
2X Speed HS PCR Master Mix (dye plus) II
500μl x 6pc
保存与运输
保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋
实验示例
示例一
以不同物种 gDNA 为模板，扩增不同 GC 含量的 DNA 片段，能很好地扩增出高 AT 及高 GC 的 DNA 片段。
反应程序：
电泳结果如下图所示：
示例二
挑取 E.coli 单菌落加入至 10μl RNase free water 中，混匀后取 2 μl 菌液为模板，扩增不同长度的 DNA 片段，都能获得很好地扩增效果。
反应程序（5kb以下片段）：
*：5 kb 以下片段用 15 sec / kb；5 kb 以上片段 20 sec / kb。
电泳结果如下图所示：
示例三
以 Human gDNA 为模板，添加不同模板量（500 ng、200 ng、100 ng、10 ng、1 ng、100 pg），采用本试剂盒扩增 4 kb DNA 片段，模板量低至 1 ng 时，能扩增出目的片段。
反应程序:
电泳结果如下图所示：
示例四
以 Human gDNA 为模板，采用本试剂盒扩增不同长度 DNA 片段，可很好扩增 30 kb 的 DNA 片段。
Answer: ① 引物长度通常在 20～30 nt。
② 引物GC含量在 40～60%，碱基随机分布，避开局部富含 GC 或 AT；引物之间不应有互补性，以防引物二聚体的形成。
③ 引物的Tm值在 55 - 70℃ 之间，上下游引物的 GC 含量尽量保持接近，Tm 值相差一般不超过 5℃。
Q4：PCR 用引物的使用量
Answer: ① PCR 反应中，使用引物的终浓度可以在 0.1 μM～1.0 μM 之间选择，引物的浓度太低时，会导致扩增产物太少；引物浓度太高时，比较容易出现非特异性扩增反应。
② 引物的浓度也需要根据加入模板 DNA 的量进行适当调整，模板添加量较多时，建议适当降低引物的浓度，当模板 DNA 的量较少时，建议提高引物的浓度。
Q5：如何避免 PCR 出现假阳性扩增
Answer: ① 进行 PCR 实验时，建议划分独立的实验区域，配制 PCR 反应体系时做好防污染工作，避免出现污染导致假阳性扩增。
② 为了避免出现交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将模板吸入加样枪内或溅出离心管外。
③ 建议在进行 PCR 实验时设立适当的阳性对照和阴性对照，以便对出现异常结果的原因进行判断、排查。
Q6：PCR 目的条带无扩增
Answer:
可能原因
建议
DNA模板
① 应对模板 DNA 的浓度和纯度进行检测（cDNA 模板不建议测浓度），并通过凝胶电泳检测模板 DNA 完整性，如 DNA 模板为粗提模板，可选择抗抑制能力强的具有针对性的 PCR 试剂盒。 ② 若模板 DNA 浓度太低，应适当增加起始量或 PCR 循环数。
目的片段 GC 含量高或富含二级结构
可选择针对高 GC 含量扩增的 PCR 试剂盒；适当增加变性时间或温度 ，高效解离双链 DNA 模板。
长片段
可使用适合长片段 PCR 扩增的 DNA 聚合酶；适当降低退火和延伸温度，促进引物结合和提高酶热稳定性；根据扩增片段长度，增加延伸时间。
一般PCR系列
