SteadyPure 植物 RNA 提取试剂盒

¥1,180.00

货号AG21019
分类核酸纯化系列、RNA提取

产品详情

产品描述

本制品可从 50~100mg 各种植物(简单植物和富含多糖多酚、富含淀粉、富含油脂等复杂植物)的组织材料(根、茎、叶、花、果实、种子)及真菌等样本中提取获得总 RNA。试剂盒采用独特的裂解系统,无需有毒的酚氯仿抽提,能在迅速裂解组织的同时抑制细胞释放出的核酸酶,保持 RNA 的完整性,同时创造适宜的条件利于 RNA 吸附到硅胶膜上。利用 DNase I 去除残留的基因组 DNA,再通过两种不同的缓冲液洗涤去除盐、蛋白质和大分子等杂质,最后用 RNase Free Water 洗脱,得到高纯度、高收量的 RNA。
本制品包含两种不同的裂解体系:简单植物裂解体系和复杂植物裂解体系。简单植物裂解体系提供的裂解液 Buffer RLS 主要成分为异硫氰酸胍,适用于大多数植物组织的裂解。由于某些植物次级代谢产物较特殊,异硫氰酸胍易使样品产生沉淀,导致 RNA 提取效果不佳,此时可以尝试使用复杂植物裂解体系,复杂植物裂解体系是在裂解液 Buffer PPS 和 Buffer PA-2 的作用下去除多糖多酚、淀粉、油脂等复杂成分,再通过 Buffer RLS 裂解植物组织。使用本产品获得的 RNA 纯度高,蛋白质、基因组 DNA 和其他杂质的污染少,可以直接用于 RT-PCR、Real Time RT-PCR、构建 cDNA 文库、Northern 杂交、斑点杂交、Poly A筛选、体外翻译、RNA 分解酶的保护分析、分子克隆、芯片分析等各种分子生物学实验。

产品组成
组分 规格
50X DTT Solution*1 700μl
DNase I (RNase free)*1 200μl
10X DNase I Buffer*1 1ml
Buffer PPS 25ml
Buffer PA-2 1.5ml X 2
Buffer RLS 15ml x 2
Buffer RWA 30ml
Buffer RWB*2 30ml
RNase Free Water*3 13ml
Plant RNA Mini Columns*4 50sets
Collection tubes 50pcs
RNase Free Tubes*4 50pcs

* 1 此三种组分包装于 Package 2-1 中,需放置于 -20℃ 保存;其余组分均包装于 Package 2-2 中,室温 (15-25℃) 保存。
* 2 Buffer RWB 在首次使用前,请添加 70ml 的 100% 乙醇(Buffer RWB 与无水乙醇体积比为 3∶7),混合均匀后在瓶子上做好标记,室温保存。
* 3 开启后建议保存于 -20℃。
* 4 此组分仅用于洗脱 RNA,前期裂解所用离心管需自备。

保存与运输

保存温度:
Package 2-1 -20℃ 保存;
Package 2-2 室温(15-25℃)保存。

运输温度:
Package 2-1 干冰或 -20℃ 冰袋运输;
Package 2-2 室温运输。

产品说明书

Q1:RNA 降解

Answer: ① 实验材料本身的原因:
解决方案:取样时尽可能选择新鲜、完整的材料,完成取样后根据实验材料特性用液氮或样本保存剂及时处理后进行实验或在 -80℃ 条件下保存(保存过程中避免样本反复冻融)。

② 实验环境中或实验用具导致 RNA 降解:
解决方案:在进行 RNA 提取实验前,使用酒精或核酸酶清除剂对操作台面进行 RNase 清除处理;提取过程中需要使用到的研钵等实验器皿可通过高温灭活去除 RNase,使用的枪头、Tube 管、离心管等耗材都需要确保无菌无酶。

③ 操作过程导致的 RNA 降解:
使用液氮研磨组织材料时,应不断补充液氮,以确保提取的 RNA 不被降解;RNA 提取实验需要根据产品按照说明书中所建议的实验环境进行操作,如(保持实验在低温环境下进行、低温离心等),实验操作过程尽可能快速;实验操作过程中,请佩戴一次性手套和口罩进行所有试剂配制和实验操作,实验过程中尽量不要说话及来回走动,操作过程中避免物品从离心管上方过,以避免 RNase 污染。

④ 样品上样量过多导致的 RNA 降解:
说明书推荐的上样量是按照裂解液的使用量进行匹配推荐的。若样品太多,裂解液过少,会导致裂解不充分,使 RNA 降解。

⑤ RNA 保存:
提取完成的 RNA 建议分装后在 -80℃ 长期保存或 -20℃ 短期保存,尽快使用,避免反复冻融。

Q2:RNA 收量低

Answer: ① 样本组织特性所导致的产量较低:
解决方案:对于富含多糖多酚的植物样本建议选择具有针对性的植物 RNA 提取试剂盒。对于蛋白含量较高的样本,用氯仿抽提后,如上清仍含白色絮状物,可以使用氯仿再次对上清进行抽提。使用 RNAex 提取油脂含量高的组织 RNA 时,氯仿抽提后除正常的三层分层外还会有一层油滴层,吸取水相时需要避免吸到油滴层。

② 样品上样量不当导致的产量低:
解决方案:对于 RNA 含量较低的组织,需要在液氮中对组织样本进行充分研磨破碎,同时可适当提高起始材料的用量;但切勿超过说明书建议最大起始量,否则会导致裂解不充分,从而影响 RNA 收量。

③ 洗脱不充分
解决方案:使用柱式法试剂盒提取 RNA 时,RNA 洗脱体积建议不少于 30μl,洗脱液尽量加至膜中央,适当孵育 3~5 min使 RNA 完全溶解。

Q3:存在基因组 DNA 残留

Answer: ① 样本材料中核酸含量高:
解决方案:对于核酸含量较高的组织样本(脾脏、胸腺等组织等),建议选择带 gDNA 去除柱的试剂盒去除 gDNA(AG21017)或使用 DNase I 去除基因组 DNA。

② 样本使用量超出了试剂处理范围:
解决方案:建议增加试剂用量或减少样本上样量。

③ 氯仿抽提法分层吸取上清时触碰到了中间层:
解决方案:建议使用小量程的移液枪少量多次吸取。

Q4:如何对 RNA 质量进行判断

Answer: RNA质量主要从 RNA 完整度和 RNA 的纯度两个方面进行检测: 通过琼脂糖凝胶电泳验证 RNA 完整度,当 RNA 存在降解时建议重新提取 RNA 后再进行反转录实验;RNA 的纯度可以通过测定 OD260/280 和 OD260/230 两个比值进行判断,在 1.8 - 2.1 范围内表示纯度较高。

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