40X Dilution Buffer(Yellow)

¥50.00

货号AG11737
分类定量 PCR 系列、染料法 qPCR 预混液

产品详情

产品描述

本制品是黄色模板稀释液,搭配本公司定量示踪产品使用(产品信息可参考附录:定量示踪产品列表),可实现移液过程可视化:将黄色稀释液与模板混匀后,加入到蓝色的2X Premix 中,溶液会从蓝色变成绿色,可根据颜色变化确认是否添加模板,有利于大量样品的加样,减少了误操作概率。

产品组成
组分 规格
40X Dilution Buffer(Yellow) 500 μl

 

保存与运输
保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋运输

产品说明书

Q1:进行荧光定量实验时 cDNA 模板需要稀释吗?如何确定需要稀释的倍数?

Answer: 若基因表达量不是太低,通常建议将 cDNA 进行稀释。稀释倍数应根据目的基因的表达量情况来决定,可进行预实验,构建一系列浓度梯度的 cDNA 模板,选择 CT 值落在 15 - 35 范围内的稀释倍数即可。
(如使用 cDNA 原液进行检测的时候,cDNA 原液使用体积不要超过定量 PCR 反应总体积的 10%。)

Q2:ROX Reference Dye 的作用是什么,如何使用?

Answer: ROX Reference Dye 可用于定量 PCR 过程中孔间荧光信号校准,是否添加 ROX 应根据 qPCR 仪器型号决定(可参考下图)。艾科瑞生物提供 2 种浓度的 ROX 染料溶液,也提供预混了不同浓度 ROX Reference Dye 的染料法荧光定量试剂盒,能够有效地减少单加或漏加 ROX 带来的实验误差。

Q3:实验重复性差

Answer: ① 加样体积不准确:移液枪可能不准,应定期校准移液枪;应现将引物、试剂和水配制成预混液再进行分装,以减少加样误差。
② 模板浓度过低:当反应体系中模板浓度过低时,CT 会很大,通常 35 以上的 CT 值结果会不稳定,不具有参考性。

Q4:NTC 出现扩增

Answer: ① 引物二聚体:可配合熔解曲线分析,若 NTC 的熔解曲线和目的基因熔解曲线峰不重叠(Tm 通常在 80℃ 之前),则为引物二聚体峰。NTC 中没有模板,引物溶液容易自身结合形成二聚体,当加入模板后,模板优先结合引物,二聚体消失,则该实验结果可用。
② 模板污染:若 NTC 的熔解曲线峰和目的基因熔解曲线峰重叠,则为模板污染。可分别对实验 NTC 所用的无酶水、试剂、引物等进行更换,以排除污染来源。

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