¥1,200.00
本制品是采用 SYBR® Green 嵌合荧光法进行 qPCR 的专用试剂，是一种 2 x Premix 试剂，反应液配制简便。本制品中 SYBR® Green 浓度、PCR 反应体系都进行了优化，特异性强、PCR 扩增效率高，可以进行高灵敏度的 Real Time PCR 反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，从而对靶基因进行准确定量、检测。
① 本制品是一种 2X 预混液，预先混有 SYBR® Green I，反应液配制十分简单，仅需加入引物、模板及 RNase free water 即可进行 qPCR 反应。
② 本制品对 SYBR® Green I 浓度及 PCR 反应体系进行了优化，具有扩增效率高、扩增特异性强等特点。
| 组分 | 规格 |
| 2X SYBR® Green Pro Taq HS Premix II | 1ml x 5pc |
采用本试剂盒进行荧光定量 RT-PCR 检测 Human βActin 基因，模板 cDNA 添加量 （相当于 Total RNA 量）为 100ng ~0.1pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂预混液(用于 qPCR) (Code. AG11706)。结果如下：
结果如上图所示：
①作曲线 R2=1.000，扩增效率 99.0%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量，100ng ~0.1pg cDNA 浓度（相当于 Total RNA 量）范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰，扩增特异性强。
采用本试剂盒进行两步法荧光定量 RT-PCR 检测 Mouse malat1 基因，模板 cDNA 添加量（相当于 Total RNA 量）为 100ng ~0.1pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂预混液（用于 qPCR）（Code. AG11706）。结果如下：
结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.999，扩增效率 98.0%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量，100ng ~0.1pg cDNA 浓度（相当于 Total RNA 量）范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰，扩增特异性强。
Answer: 若基因表达量不是太低，通常建议将 cDNA 进行稀释。稀释倍数应根据目的基因的表达量情况来决定，可进行预实验，构建一系列浓度梯度的 cDNA 模板，选择 CT 值落在 15 - 35 范围内的稀释倍数即可。
（如使用 cDNA 原液进行检测的时候，cDNA 原液使用体积不要超过定量 PCR 反应总体积的 10%。）
Answer: ROX Reference Dye 可用于定量 PCR 过程中孔间荧光信号校准，是否添加 ROX 应根据 qPCR 仪器型号决定（可参考下图）。艾科瑞生物提供 2 种浓度的 ROX 染料溶液，也提供预混了不同浓度 ROX Reference Dye 的染料法荧光定量试剂盒，能够有效地减少单加或漏加 ROX 带来的实验误差。
Answer: ① 加样体积不准确：移液枪可能不准，应定期校准移液枪；应现将引物、试剂和水配制成预混液再进行分装，以减少加样误差。
② 模板浓度过低：当反应体系中模板浓度过低时，CT 会很大，通常 35 以上的 CT 值结果会不稳定，不具有参考性。
Answer: ① 引物二聚体：可配合熔解曲线分析，若 NTC 的熔解曲线和目的基因熔解曲线峰不重叠（Tm 通常在 80℃ 之前），则为引物二聚体峰。NTC 中没有模板，引物溶液容易自身结合形成二聚体，当加入模板后，模板优先结合引物，二聚体消失，则该实验结果可用。
② 模板污染：若 NTC 的熔解曲线峰和目的基因熔解曲线峰重叠，则为模板污染。可分别对实验 NTC 所用的无酶水、试剂、引物等进行更换，以排除污染来源。
一般PCR系列