SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（含ROX）

¥1,200.00

货号AG11718
分类定量PCR系列、染料法qPCR预混液

产品详情

产品描述

本制品是采用 SYBR® Green I 嵌合荧光法进行 qPCR 的专用试剂，是在SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit (AG11701) 产品基础上预混了 ROX 的 2X Premix 试剂，方便使用。本制品中 SYBR® Green浓度、PCR 反应体系都进行了优化，采用了反应性能优越的 Pro Taq HS 体系（混合了 Taq 抗体），能够有效抑制非特异性扩增，提高 PCR 扩增效率，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测。

产品优势

① 本制品是一种 2X 预混液，预先混有 SYBR® Green I，反应液配制十分简单，仅需加入引物、模板及 RNase free water 即可进行 qPCR 反应。
② 本制品对 SYBR® Green I 浓度及 PCR 反应体系进行了优化，能够有效抑制非特异性扩增，提高 PCR 效率。
③ 本制品预混了 ROX Reference Dye，方便使用，有效地减少单加 ROX 带来的实验误差。

产品组成
组分 规格
2X SYBR® Green Pro Taq HS Premix (Rox Plus) 1ml x 5pc
保存与运输
保存温度：-20℃（避光保存，长期保存放置在 -20℃，产品融化后可于 4℃， 保存 1 个月。）
运输温度：干冰运输

实验示例

示例一

采用本试剂盒进行两步法荧光定量 RT-PCR 检测 Mouse GAPDH 基因，模板 cDNA 添加量（相当于 Total RNA 量）为 100ng ~0.1pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂盒(用于 qPCR)(Code. AG11706)。结果如下：

结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.999，扩增效率 98.4%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量，100ng ~0.1pg cDNA 浓度（相当于 Total RNA 量）范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰，扩增特异性强。

示例二

采用本试剂盒进行两步法荧光定量 RT-PCR 方法检测 Human β-Actin 基因，模板 cDNA添加量（相当于 Total RNA 量）为 100ng ~ 1pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂盒(用于 qPCR)(Code. AG11706)。结果如下：

结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.999，扩增效率 101%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量，100ng ~1pg cDNA 浓度（相当于 Total RNA 量）范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰，扩增特异性强。

产品说明书

Q1：进行荧光定量实验时 cDNA 模板需要稀释吗？如何确定需要稀释的倍数？

Answer: 若基因表达量不是太低，通常建议将 cDNA 进行稀释。稀释倍数应根据目的基因的表达量情况来决定，可进行预实验，构建一系列浓度梯度的 cDNA 模板，选择 CT 值落在 15 - 35 范围内的稀释倍数即可。
（如使用 cDNA 原液进行检测的时候，cDNA 原液使用体积不要超过定量 PCR 反应总体积的 10%。）

Q2：ROX Reference Dye 的作用是什么，如何使用？

Answer: ROX Reference Dye 可用于定量 PCR 过程中孔间荧光信号校准，是否添加 ROX 应根据 qPCR 仪器型号决定（可参考下图）。艾科瑞生物提供 2 种浓度的 ROX 染料溶液，也提供预混了不同浓度 ROX Reference Dye 的染料法荧光定量试剂盒，能够有效地减少单加或漏加 ROX 带来的实验误差。

Q3：实验重复性差

Answer: ① 加样体积不准确：移液枪可能不准，应定期校准移液枪；应现将引物、试剂和水配制成预混液再进行分装，以减少加样误差。
② 模板浓度过低：当反应体系中模板浓度过低时，CT 会很大，通常 35 以上的 CT 值结果会不稳定，不具有参考性。

Q4：NTC 出现扩增

Answer: ① 引物二聚体：可配合熔解曲线分析，若 NTC 的熔解曲线和目的基因熔解曲线峰不重叠（Tm 通常在 80℃ 之前），则为引物二聚体峰。NTC 中没有模板，引物溶液容易自身结合形成二聚体，当加入模板后，模板优先结合引物，二聚体消失，则该实验结果可用。
② 模板污染：若 NTC 的熔解曲线峰和目的基因熔解曲线峰重叠，则为模板污染。可分别对实验 NTC 所用的无酶水、试剂、引物等进行更换，以排除污染来源。

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