SYBR® Green Pro Taq HS预混型 qPCR 试剂盒(含示踪染料)

¥1,200.00

货号AG11733
分类定量 PCR 系列、染料法 qPCR 预混液

产品详情

产品描述

本制品是采用 SYBR® Green 嵌合荧光法进行 qPCR 的专用试剂,2X Premix 中添加了蓝色染料,搭配黄色模板稀释液,实现移液过程可视化:将黄色稀释液与模板混匀后,加入到蓝色的反应液中,溶液会从蓝色变成绿色,可根据颜色变化确认是否添加模板,有利于大量样品的加样,减少了误操作概率。

本制品中 SYBR® Green 浓度、PCR 反应体系都进行了优化,采用了反应性能优越的 Pro Taq HS 体系(混合了 Taq 抗体),能够有效抑制非特异性扩增,提高 PCR 扩增效率,可以进行高灵敏度的 Real Time PCR 反应,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,从而对靶基因进行准确定量、检测。

 

产品优势

① 2X Premix 中添加了蓝色染料,搭配黄色模板稀释液,实现移液过程可视化,提高加样效率,降低误操作概率。
② 本制品是一种 2X 预混液,预先混有 SYBR® Green I,反应液配制十分简单,仅需加入引物、模板及 RNase free water 即可进行 qPCR 反应。
③ 本制品对 SYBR® Green I 浓度及 PCR 反应体系进行了优化,具有扩增效率高、扩增特异性强等特点。

产品组成
组分 规格
2X SYBR® Green Pro Taq HS Premix(Blue) 1 ml x 5 pc
40X Dilution Buffer(Yellow) 500 μl
保存与运输
保存温度:-20℃(避光保存)
运输温度:干冰运输

实验示例

示例一

采用本试剂盒进行荧光定量 RT-PCR 检测 Mouse Hnf4a Gene(GC 含量 0%),cDNA 模板添加量(相当于 Total RNA 量)为 100 ng ~ 1 pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂盒 Ⅱ(含去除 gDNA 试剂,用于 qPCR)(Code.AG11711)。所用定量仪器:ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下:

结果如上图所示:
①工作曲线 R2=0.9958,扩增效率 95.26%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量,100 ng ~ 1 pg cDNA 浓度(相当于 Total RNA 量)范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰,扩增特异性强。

示例二

采用本试剂盒进行荧光定量 RT-PCR 方法检测 Human β-Actin Gene(GC 含量 2%),模板 cDNA 添加量(相当于 Total RNA 量)为 10 ng ~ 100 fg。cDNA 的合成使用本公司 Evo M-MLV 反转录试剂盒 Ⅱ(含去除 gDNA 试剂,用于 qPCR)(Code.AG11711)。结果如下:所用定量仪器:CFX96 Real-Time PCR Detection System。

结果如上图所示:
①工作曲线 R2=0.9994,扩增效率 96.21%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量,10 ng ~ 100 fg cDNA 浓度(相当于 Total RNA 量)范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰,扩增特异性强。

示例三

采用本试剂盒进行荧光定量 RT-PCR 检测 Human PARP1 Gene (GC 含量 4%),cDNA 模板添加量 (相当于 Total RNA 量)为 10 ng ~ 1 pg。cDNA 的合成使用本公司的 Evo M-MLV 反转录试剂盒 Ⅱ(含去除 gDNA 试剂,用于 qPCR)(Code.AG11711)。所用定量仪器:CFX96 Real-Time PCR Detection System。结果如下:

结果如上图所示:
①工作曲线 R2=0.9994,扩增效率 91.74%。
②可以在宽广的模板范围内进行准确的定量,10 ng ~ 1 pg cDNA 浓度(相当于 Total RNA 量)范围内扩增曲线呈现良好的线性关系。
③熔解曲线峰型单一、无杂峰,扩增特异性强。

产品说明书

Q1:进行荧光定量实验时 cDNA 模板需要稀释吗?如何确定需要稀释的倍数?

Answer: 若基因表达量不是太低,通常建议将 cDNA 进行稀释。稀释倍数应根据目的基因的表达量情况来决定,可进行预实验,构建一系列浓度梯度的 cDNA 模板,选择 CT 值落在 15 - 35 范围内的稀释倍数即可。
(如使用 cDNA 原液进行检测的时候,cDNA 原液使用体积不要超过定量 PCR 反应总体积的 10%。)

Q2:ROX Reference Dye 的作用是什么,如何使用?

Answer: ROX Reference Dye 可用于定量 PCR 过程中孔间荧光信号校准,是否添加 ROX 应根据 qPCR 仪器型号决定(可参考下图)。艾科瑞生物提供 2 种浓度的 ROX 染料溶液,也提供预混了不同浓度 ROX Reference Dye 的染料法荧光定量试剂盒,能够有效地减少单加或漏加 ROX 带来的实验误差。

Q3:实验重复性差

Answer: ① 加样体积不准确:移液枪可能不准,应定期校准移液枪;应现将引物、试剂和水配制成预混液再进行分装,以减少加样误差。
② 模板浓度过低:当反应体系中模板浓度过低时,CT 会很大,通常 35 以上的 CT 值结果会不稳定,不具有参考性。

Q4:NTC 出现扩增

Answer: ① 引物二聚体:可配合熔解曲线分析,若 NTC 的熔解曲线和目的基因熔解曲线峰不重叠(Tm 通常在 80℃ 之前),则为引物二聚体峰。NTC 中没有模板,引物溶液容易自身结合形成二聚体,当加入模板后,模板优先结合引物,二聚体消失,则该实验结果可用。
② 模板污染:若 NTC 的熔解曲线峰和目的基因熔解曲线峰重叠,则为模板污染。可分别对实验 NTC 所用的无酶水、试剂、引物等进行更换,以排除污染来源。

滚动到顶部