5’ / 3’ RACE 试剂盒

¥5,000.00

货号AG11618
分类反转录系列、5’ RACE & 3’ RACE 扩增

产品详情

产品描述

RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)即 cDNA 末端快速扩增技术,是以部分区域已知序列为起点,对未知基因的 cDNA 末端快速扩增技术。本制品是使用 Total RNA 或 Poly A+ RNA 作为模板进行反转录,快速扩增获得 cDNA 5’ 末端和 3’ 末端序列的试剂盒。试剂盒包含 5’ RACE 和 3’ RACE 扩增所需组分,可根据需求进行选择。
进行 5’ RACE 时,利用反转录酶的模板转换活性(Template-switching),在 RNA 的 5’ 末端添加接头,可直接进行 RACE PCR 扩增,不需要 Adaptor 连接等步骤,整个流程更快、操作更简单;PCR 扩增体系使用本公司性能优越的 L-Exp Taq HS DNA Polymerase,具有扩增长片段或高 GC 含量等复杂片段扩增能力,精心优化的 Buffer 体系,使得本制品具有较高的特异性,可减少 RACE 实验中的弥散现象。
本制品包含精心优化的 5’ RACE 和 3’ RACE 反应的所有试剂,请使用本试剂盒包含的试剂进行反转录和 PCR 扩增实验,如需替换,请先进行验证。

产品优势
① 操作便捷,不需要 Adaptor 的连接步骤;
Evo M-MLV RTase for RACE 具有较强的反转录能力,对于长片段及复杂结构模板能进行较好的反转;
L-Exp Taq HS DNA Polymerase 具有较强的扩增能力,对于长片段或高 GC 含量等复杂片段的扩增都适用;
④ 本制品可反转 10 ng ~ 1 μg 的总 RNA 或 poly A+ RNA;
⑤ RACE PCR 扩增产物可进行 TA 克隆。
产品组成
组分(Package 2-1,-80℃ 保存) 规格
Template Switching Oligo(TSO)(24 µM) 10 μl
Control Mouse Liver Total RNA(1 µg / μl) 10 μl
组分(Package 2-2,-20℃ 保存) 规格
3′ RACE RT Primer(12 µM) 10 μl
5′ RACE RT Primer(12 µM) 10 μl
Random Primer(20 µM) 10 μl
RNase Inhibitor(40 U / µl) 10 μl
5X RACE RT Buffer 40 μl
Evo M-MLV RTase for RACE(100 U / μl) 20 μl
dNTP Mix(10 mM each) 120 μl
10X Universal Primer Mix 400 μl
Tricine EDTA Buffer 1 ml x 2 pcs
Universal Short Primer(10 µM) 50 μl
Control 5′ Gene-Specific Primer(10 µM)* 25 μl
Control 3′ Gene-Specific Primer(10 µM)* 25 μl
L-Exp Taq HS DNA Polymerase(5U / μl) 25 μl
5X L-Exp Taq PCR Buffer(Mg2+ plus) 500 μl
Nuclease free water 1 ml

*:使用 Control 5′ Gene-Specific Primer 扩增出的 DNA 片段长度为 1.6 kb;使用 Control 3′ Gene-Specific Primer 扩增出的 DNA 片段长度为 0.6 kb。

保存与运输
保存温度:Package 2-1 -80℃ 保存;Package 2-2 -20℃ 保存。
运输温度:Package 2-1 -20℃ 冰袋运输或干冰运输(避免反复冻融);Package 2-2 -20℃ 冰袋运输或干冰运输。

实验示例

示例一

以本试剂盒中自带的正对照 RNA(Control Mouse Liver Total RNA)为模板,结合正对照 5’引物(Control 5′ Gene-Specific Primer)和 3’引物(Control 3′ Gene-Specific Primer)及试剂盒中其他组分分别进行 5’和 3’RACE 扩增,成功获得 5’产物(1.6 kb)和 3’产物(0.6 kb)。

电泳结果如下:

示例二

使用小鼠心脏模板,采用本试剂盒进行小鼠 Hspb1 基因 5’ RACE 扩增,一轮扩增时有非特异性条带;将一轮扩增产物进行二轮扩增(巢式 PCR),可明显提高产物特异性且有单一的目的条带。

电泳结果如下:

产品说明书

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