本产品是利用 M-MLV 反转录聚合酶的反转录试剂盒，cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。本产品是在 Evo M-MLV RT Kit with gDNA Clean for qPCR（Code. AG11705）的基础上，将引物混合制成 RT Primer Mix， 方便使用，可减少实验误差。该试剂盒使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Clean Reagent，通过42 ℃, 2min 即可除去基因组 DNA，有效的减少基因组 DNA 对 cDNA 的定量分析造成的影响 。 使用本制品合成得到的 cDNA 适用于嵌合法和探针法 qPCR 分析。
产品优势
① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reagent，能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中 RT Primer Mix 混有 Oligo dT (18T) Primer 和 Random 6 mers Primer，并对引物用量进行了优化，操作方便、减少实验误差。
③ 本制品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。
产品组成
组分
规格
gDNA Clean Reagent
100μl
5X gDNA Clean Buffer
200μl
Evo M-MLV RTase Enzyme Mix *1
100μl
5X RTase Reaction Buffer Mix I*2
400μl
RT Primer Mix*3
100μl
RNase free water
1ml x 2pc
*1：含有 Evo M-MLV RTase 与 RNase Inhibitor。
* 2：含有 dNTP。
* 3：含有 Oligo dT (18T) Primer 与 Random 6 mers Primer。
保存与运输
保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋
实验示例
示例一
向小鼠肝脏 Total RNA（分别为 2μg、200ng、20ng、2ng、200pg、20pg、2pg、0pg）中分别加入 200ng 的小鼠基因组 DNA，再使用本试剂盒去除基因组 DNA，去除基因组 DNA 后进行反转录实验，并以此 cDNA 为模板，取 2μl 的 cDNA 原液，用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。
结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.995，扩增效率是 108.0%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2μg ~ 2pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。
示例二
以不同梯度的 293T 细胞 Total RNA 为模板（2μg~20pg），用本试剂盒进行反转录，取 2μl 的 cDNA 原液，用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701) 进行 qPCR 检测 Human H32F 基因。
结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.999，扩增效率是 96.4 %。
② 不加 RNA 但添加鼠的肝脏 gDNA 样品中，Ct 值在 35cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2μg ~ 2pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。
一般PCR系列
