本产品是利用 M-MLV 反转录聚合酶的反转录试剂盒,cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。本产品是在 Evo M-MLV RT Kit with gDNA Clean for qPCR(Code. AG11705)的基础上,将引物混合制成 RT Primer Mix, 方便使用,可减少实验误差。该试剂盒使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Clean Reagent,通过42 ℃, 2min 即可除去基因组 DNA,有效的减少基因组 DNA 对 cDNA 的定量分析造成的影响 。 使用本制品合成得到的 cDNA 适用于嵌合法和探针法 qPCR 分析。
产品优势
① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reagent,能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中 RT Primer Mix 混有 Oligo dT (18T) Primer 和 Random 6 mers Primer,并对引物用量进行了优化,操作方便、减少实验误差。
③ 本制品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。
产品组成
组分
规格
gDNA Clean Reagent
100μl
5X gDNA Clean Buffer
200μl
Evo M-MLV RTase Enzyme Mix *1
100μl
5X RTase Reaction Buffer Mix I*2
400μl
RT Primer Mix*3
100μl
RNase free water
1ml x 2pc
*1:含有 Evo M-MLV RTase 与 RNase Inhibitor。
* 2:含有 dNTP。
* 3:含有 Oligo dT (18T) Primer 与 Random 6 mers Primer。
保存与运输
保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋
实验示例
示例一
向小鼠肝脏 Total RNA(分别为 2μg、200ng、20ng、2ng、200pg、20pg、2pg、0pg)中分别加入 200ng 的小鼠基因组 DNA,再使用本试剂盒去除基因组 DNA,去除基因组 DNA 后进行反转录实验,并以此 cDNA 为模板,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。
结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.995,扩增效率是 108.0%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品中,Ct 值在 35cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,2μg ~ 2pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。
示例二
以不同梯度的 293T 细胞 Total RNA 为模板(2μg~20pg),用本试剂盒进行反转录,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701) 进行 qPCR 检测 Human H32F 基因。
结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.999,扩增效率是 96.4 %。
② 不加 RNA 但添加鼠的肝脏 gDNA 样品中,Ct 值在 35cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,2μg ~ 2pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。