本制品是可以去除 cDNA 中混有的基因组 DNA 再进行 Real-Time RT-PCR 反应的专用试剂。基因组 DNA 会对 cDNA 的定量分析造成影响,本制品使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Clean Reagent,通过 42℃ 2 min 即可除去基因组 DNA。处理后的样品可以直接进行后续反转录反应合成 cDNA,再通过定量 PCR 进行基因分析。 使用本制品合成得到的 cDNA 适用于嵌合法和探针法 qPCR 分析。
产品优势
① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reagent,能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中分别配有 OligodT (18T) Primer (50μM)和 Random 6 mers Primer (400μM),可根据实际情况选择不同的引物进行反转录,亦可根据需要调整引物浓度。
③ 本产品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。
产品组成
组分
规格
gDNA Clean Reagent
100μl
5X gDNA Clean Buffer
200μl
Evo M-MLV RTase Enzyme Mix *1
100μl
5X RTase Reaction Buffer Mix I*2
400μl
Oligo dT (18T) Primer (50μM)
100μl
Random 6 mers Primer (400μM)
100μl
RNase free water
1ml x 2pc
*1:含有 RNase Inhibitor。
*2:含有 dNTP。
保存与运输
保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋
实验示例
示例一
向小鼠肝脏 Total RNA(分别为 2μg、200ng、20ng、2ng、200pg、20pg、2pg、0pg)分别加入 200ng 的小鼠基因组 DNA,使用本试剂盒进行基因组 DNA 去除反应,去除基因组 DNA 后进行反转录实验,并以此 cDNA 为模板,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR®Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit (Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。
结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.996,扩增效率 103.1%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品,Ct 值在 35cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,2μg ~ 2pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。
示例二
向 293T 细胞 Total RNA(分别为 2μg、200ng、20ng、2ng、200pg、20pg、2pg、0pg)分别加入 200ng 的人基因组 DNA,使用本试剂盒进行基因组 DNA 去除反应。并以此 cDNA 为模板,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit (Code. AG11701) 扩增 GAPDH 基因。