Evo M-MLV 反转录预混型示踪试剂盒(含去除 gDNA 试剂,用于qPCR,黄色)

¥1,500.00

货号AG11734
分类反转录系列、反转录试剂盒(qPCR专用)

产品详情

产品描述

本产品是利用 M-MLV 反转录聚合酶的反转录试剂盒,cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。该制品中 5X gDNA Clean Reaction Mix 可去除残留的基因组 DNA,保证定量结果的准确性;5X Evo M-MLV RT Reaction Mix(Yellow)含有黄色染料,能实现反转录移液可视化,避免漏加试剂,且该试剂包含反转录反应所需的所有组分,并针对 Oligo dT (18T) Primer、 Random 6 mers Primer 用量进行了优化,使反转录产物兼容嵌合法和探针法 qPCR 分析,能够进行高效的基因表达分析。

5X Evo M-MLV RT Reaction Mix(Yellow)含有黄色染料,反转录获得的 cDNA 呈现黄色,可搭配不同定量试剂使用:

① 可以搭配添加了蓝色染料的 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Tracking Kit(Code. AG11733)使用,避免移液错误,实现模板移液过程可视化:将本制品反转录获得的 cDNA(黄色)加入至蓝色的 qPCR 反应液中,溶液会变成绿色,可根据颜色变化确认是否添加模板,有利于大量样品的加样,减少了误操作概率。
② 可搭配本公司其他的定量试剂使用【如 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit (Code. AG11701)】,当黄色 cDNA 加入至无色定量试剂中,会变成浅黄色,可实现移液可视化。但若 cDNA 原液加入量较少,颜色变化不明显,可能会无法辨别。
③ 其他公司定量产品搭配本品使用性能未经验证,如需使用,请先测试性能。

产品优势

① 本制品含有黄色染料,反转时可实现移液可视化。
② 反转录获得的 cDNA 呈现黄色:可搭配蓝色的 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Tracking Kit(Code. AG11733)使用,实现模板移液过程可视化,避免移液错误,提高加样效率,降低误操作概率。也可搭配本公司其他定量试剂使用。
③ 含有基因组 DNA 去除试剂 5X gDNA Clean Reaction Mix,能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
④ 本试剂盒将去除基因组及反转录体系分别配制成预混液,使用方便,可减少试剂损失及实验误差。
⑤ 本制品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

产品组成
组分 规格
5X gDNA Clean Reaction Mix 200μl
5X Evo M-MLV RT Reaction Mix(Yellow)*1 400μl
RNase free water 1ml x 2pc

*1:含有 Evo M-MLV RTase、RNase Inhibitor、dNTPs、Oligo dT (18T) Primer、Random 6 mers Primer 和黄色染料。

保存与运输
保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋

实验示例

示例一

以小鼠肝脏 Total RNA(100 ng ~1 pg)为模板,使用本试剂盒去除基因组 DNA,然后进行反转录实验,并以此 cDNA 为模板,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Tracking Kit (Code. AG11733 )进行 qPCR 扩增检测 APOE 1 基因。所用定量仪器:CFX96 Real-Time PCR Detection System。结果如下:

结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.998,扩增效率为 99.9%;
② 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,100 ng ~ 1 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
③ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。

示例二

以 293T 细胞 Total RNA(100 ng ~10 pg)为模板,使用本试剂盒去除基因组 DNA,然后进行反转录实验,并以此 cDNA 为模板,取 2μl 的 cDNA 原液,用 SYBR® Green Premix Pro Taq HS qPCR Tracking Kit (Code. AG11733 )进行 qPCR 扩增检测β-actin基因。所用定量仪器:CFX96 Real-Time PCR Detection System。结果如下:

结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.998,扩增效率是 93.4%。
② 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,100 ng ~ 10 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
③ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。

 

产品说明书

Q1:如何计算加入模板 RNA 的用量

Answer: 进行反转录实验时,在添加模板前可对 RNA 浓度进行测定,根据选择的反转录试剂盒说明书,将模板量控制在推荐 RNA 用量的范围内,并根据 RNA 的浓度计算需要加入模板的体积。

Q2:带有 5X gDNA Clean Reaction Mix 的反转录试剂盒能否跳过去除 gDNA 的步骤,直接反转录?RNA 中残留 gDNA,会影响后面的定量实验吗?

Answer:
带有 gDNA Clean 组分的试剂不可跳过去除 gDNA 的步骤直接反转录,否则会影响反转录效率;反转录实验时如果模板 RNA 中存在 gDNA 残留严重,会影响后续定量实验的准确性。

Q3:如何选择合适的反转录引物

Answer: ● 反转录实验常用的引物有三种类型:Oligo dT,随机引物和特异性引物。
● Oligo dT 能够与真核生物成熟 mRNA 的 3’ 端 Poly A 尾配对,适用于具有 Poly 尾的 RNA,对 RNA 模板质量的要求相对较高;当长链 RNA 存在一些复杂的二级结构时,或者模板 RNA 没有 polyA 尾时,建议使用随机引物,随机引物应用范围广,但合成的 cDNA 长度较短;基因特异性引物是根据目的基因设计的引物,通常在一步法中使用较多,但通过特异性引物反转录得到的 cDNA 只能扩增该目的基因。
● 在 Evo M-MLV 预混型反转录试剂盒(AG11706/AG11728)中,预混液中含有 Oligo dT 引物和随机引物,并对引物用量进行了优化,保证 RNA 的反转录效率,操作方便,同时有助于提高定量结果的重复性。

Q4:反转录实验操作注意事项

Answer: 反转录多个样本时,如果使用的是非预混试剂盒,例如 AG11711,建议将酶、引物、buffer、水预先配制成预混液,充分混匀离心后再进行分装。

Q5:可以通过检测 cDNA 浓度来判定反转录效率吗?

Answer: 反转录反应后得到的产物 cDNA 是混合物,除了 cDNA 产物以外,剩余试剂的残留,会干扰浓度测定结果,检测得到的浓度无法反映真实的 cDNA 产量。

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