《使用说明》
(1)在顶部"载体线性化方式"单选框内选择合适的载体线性化方式。
(2)根据线性化方式输入载体序列并选择酶切位点:
a. 如载体线性化方式为"单酶切线性化",将载体完整序列或克隆位点附近序列输入至第一个文本框中,并在酶切位点选择列表中选择线性化酶切位点。
b. 如载体线性化方式为"双酶切线性化",将载体完整序列或克隆位点附近序列输入至第一个文本框中,并在 5' 和 3' 在酶切位点选择列表中选择线性化酶切位点。
c. 如载体线性化方式为" PCR 扩增线性化",将载体克隆位点上游序列输入至第一个文本框中,将载体克隆位点下游序列输入至第二个文本框中。
(3)在下方"插入片段个数"单选框内选择插入片段个数。
(4)按照 5' 至 3' 克隆顺序在下部文本框中依次输入各插入片段完整序列,序列方向 5' 至 3' 。
(5)点击"生成 OK Clon 扩增引物"按钮。下方文本框内即为各插入片段完整正反向扩增引物,每条引物包含重组序列(小写)和特异性扩增序列(大写)两部分。如克隆载体线性化方式为 PCR 线性化,底部文本框内会显示相应载体扩增引物序列。
(6)点击"清空"按钮,继续设计另外一组插入片段的 OK Clon 克隆引物。
《注意事项》
(1)如果载体线性化方式为单酶切线性化,且酶切位点不唯一,软件默认输入序列中最外端两个酶切位点之间的序列被切除;
(2)如果载体线性化方式为双酶切线性化,软件默认输入序列中两个酶切位点之间的序列被切除;
(3)如果载体线性化方式为 PCR 扩增线性化,软件默认将插入片段克隆至两输入序列之间。