（1）在顶部单选框内选择适合的载体线性化方式。
（2）根据线性化方式输入载体序列并选择酶切位点：
a. 如载体线性化方式为"单酶切线性化"，将载体完整序列或克隆位点附近序列输入至第一个文本框中，并在酶切位点选择列表中选择线性化酶切位点。
b. 如载体线性化方式为"双酶切线性化"，将载体完整序列或克隆位点附近序列输入至第一个文本框中，并在 5' 和 3' 在酶切位点选择列表中选择线性化酶切位点。
c. 如载体线性化方式为" PCR 扩增线性化"，将载体克隆位点上游序列输入至第一个文本框中，将载体克隆位点下游序列输入至第二个文本框中。
（3）将插入片段完整序列输入至下方文本框中，方向 5' 至 3' 。
（4）点击“生成 OK Clon 扩增引物”按钮。下方文本框内即为该插入片段完整正反向扩增引物，每条引物包含重组序列（小写）和特异性扩增序列（大写）两部分。如克隆载体线性化方式为 PCR 线性化，底部文本框内会显示相应载体扩增引物序列。
（5）点击“清空”按钮，继续设计另外一个插入片段的 OK Clon 克隆引物。
（1）如果载体线性化方式为单酶切线性化，且酶切位点不唯一，软件默认输入序列中最外端两个酶切位点之间的序列被切除；
（2）如果载体线性化方式为双酶切线性化，软件默认输入序列中两个酶切位点之间的序列被切除；
（3）如果载体线性化方式为 PCR 扩增线性化，软件默认将插入片段克隆至两输入序列之间。
* 选择载体线性化方式：
* 请输入克隆载体完整序列或克隆位点附近序列（方向 5' 至 3' ，克隆位点上下游序列长度至少各为 20 bp ）：
0
* 请输入插入片段完整序列（方向 5' 至 3' 至少 50 bp ）：
0