4X一步法 RT-qPCR 预混型探针法试剂盒(含 UNG，可兼容引物探针预混)

产品货号： CM0273

规格

250 rxns / 20 μl

清除

¥2,200

产品描述

本产品是基于探针法进行一步法 RT-qPCR 专用试剂盒，反转录和 qPCR 反应在同一管内完成，操作简单、快捷。
本产品使用了新型改造的 Evo Super M-MLV 反转录酶，配合优化的 Accurate Taq HS 聚合酶，可以在短时间内高效合成 cDNA 并进行高效稳定的 qPCR 扩增，并支持引物探针提前预混。本产品适用性广，杂质耐受强，对于不同复杂度的基因均可以进行很好的扩增，同时该产品可兼顾单重或多重检测。适用于 DNA/RNA 等微量病毒的检测。
本产品中还引入了 dUTP/UNG 防污染系统，在 PCR 反应过程中以 dUTP 取代 dTTP，利用 UNG 酶能选择性水解含 dU 的 DNA 链，而对不含dU 的 DNA 链没有任何影响的特性，除去 PCR 反应体系配制过程中引入的含 dU 的污染模板，从而可有效防止 PCR 假阳性结果的产生；同时，本产品中还添加了在常温状态下能够抑制 DNA Polymerase 活性的单克隆抗体，能够有效抑制非特异性扩增，提高反应灵敏度，提升结果准确性。

产品优势

1. 本产品是一步法 RT-qPCR 反应试剂盒，可在单管内完成反转录与 qPCR 反应，简化操作，提高效率，可有效地降低因多次操作而造成污染的可能性。
2. 本产品采用了新型改造的 Evo Super M-MLV 反转录酶，配合优化的 Accurate Taq HS 聚合酶，搭配精心优化的反应体系，具有特异性强、扩增效率高等特点。
3. 本产品支持引物探针提前预混。
4. 本产品灵敏度高，可对个位数拷贝模板稳定检出，并可进行单重或者多重检测。
5. 本产品可以进行 DNA/RNA 共检。
6. 本产品中引入了 dUTP/UNG 防污染系统，可除去含 dU 的 PCR 产物污染，从而有效防止出现 PCR 假阳性结果，提升实验结果的准确性。

产品组成

组分	规格
4X One Step Probe Mixture II ( UNG Plus )*	1.25 ml

*：含有 Evo Super M-MLV RTase Enzyme、Accurate Taq HS DNA Polymerase、UNG Enzyme 与 RNase Inhibitor 及反应 buffer 等。

保存与运输

保存温度：-20℃保存
运输温度：干冰运输或-20℃冰袋运输。

一、提前预混引物探针稳定性实验

示例一

以 293T 细胞 Total RNA 为模板，进行 37℃ 加速稳定性实验，预混引物探针后将 37℃ 放置 3 天、5 天的加速样品和未处理样品同时进行检测。反应体系中模板加入量为 10 ng，1 ng 与 100 pg。所用定量仪器为 ABI QuantStudio^TM 5 Real-Time PCR Systems。实验结果如下：

[FAM 通道]

结果如上图所示：
1、37℃ 放置 3 天、5 天的加速样品（玫红色与蓝色曲线）的性能和未处理样品（绿色曲线）的性能相当。
2、本产品可以进行单重检测。

[VIC 通道]

结果如上图所示：
1、不同浓度的模板在 45 cycles 以内均能获得良好的扩增；
2、阴性对照在 45 cycles 内没有检出；
3、扩增效率为 93.4%，R²=0.9998。

示例二

以猪蓝耳病毒 PRRSV JXA1 标准物质 [ GBW(E)090929 ]、猪血 RNA 为模板进行，用 RNase free water 代替模板作为阴性对照，预混引物探针后将 37℃ 放置 3 天加速样品和未处理样品同时进行二重检测，4℃ 放置 30 天的加速样品和未处理样品同时进行二重检测，分别检测
ORF 基因（GC 含量为 56%，FAM 通道）、CYTB 基因（GC 含量为 40%，HEX通道）。反应体系中 PRRSV JXA1 模板加入量为 10 copies，猪血 RNA 模板加入量为 100 pg。所用定量仪器为 ABI QuantStudio^TM 5 Real-Time PCR Systems。实验结果如下：

[FAM 通道]

[HEX 通道]

结果如上图所示：
1、37℃ 放置 3天加速样品、4℃ 放置 30 天加速样品（玫红色曲线）的性能和未处理样品（浅绿色曲线）的性能相当。
2、阴性对照在 45 cycles 内没有检出。
3、本产品可以进行二重检测。

二、支持快速程序

示例一

以人鼻 C 型 RNA 病毒、人腺 7 型 DNA 病毒标准物质与 293T 细胞 Total RNA 为模板进行三重检测，反应体系中人鼻 C 型 RNA 病毒模板加入量为 10 copies，人腺 7 型 DNA 病毒模板加入量为 25 copies，293T 细胞 Total RNA 模板加入量为 100 pg，三种模板均检测 14 个复孔，用RNase free water 代替模板作为阴性对照。同时配制后分别进行标准程序及快速程序，所用定量仪器为 ABI QuantStudio^TM 5 Real-Time PCR Systems。

程序如下：