Evo Super M-MLVPlus 1st cDNA 合成预混液

产品货号:AG11623

¥1,280

产品描述

本产品是从 total RNA 或 poly(A) RNA 起始合成 1st strand cDNA 的试剂盒。合成 1st strand cDNA 所需的反转录酶 Evo Super M-MLV plus、RNase Inhibitor、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture 及反应 Buffer 已预混成 Premix 型试剂,只需要添加 RNA 模板及水即可简单快速开始反应。
本产品通过添加辅助蛋白及优化 Buffer 组成,减少了反转录反应前的 RNA 变性操作,操作更加方便。
本产品具有合成效率高、反应速度快、灵敏度高、热稳定性高、抗抑制能力强等特点,能在 42℃ ~ 60℃ 条件下更高效合成 1st Strand cDNA;同时由于反转录反应可以在高温下进行,使用 Gene Specific Primer 合成 1st Strand cDNA 提升了反转录效率及特异性。
本产品合成的 1st strand cDNA 适用于 2nd strand cDNA 合成、杂交、PCR 法扩增,全长 cDNA 文库的制备等。本产品中包含 Random 6 mers,可以从不含有 poly(A) 的 RNA 合成 cDNA,同时也适用于 Real Time PCR 进行基因表达分析。

产品优势

1. 操作方便:已配制成预混液,只需加入模板 RNA 及水即可反应,且试剂在 -20℃ 不会冻结,试剂从 -20℃ 冰箱取出即可进行反应配制。
2. 热稳定性强:可在 42℃ ~ 60℃ 条件下进行反转录反应,高温有利于具有复杂二级结构 RNA 模板的合成。
3. 杂质耐受性强:对 RNA 中残留的抑制剂(如异硫氰酸胍、乙醇、EDTA、肝素钠与血红素等干扰物质)具有良好的抗性。
4. 使用范围广:合成的 cDNA 可用于常规 PCR 及 qPCR,产品中附带了 Random 6 mers,可以从不含有 poly(A)+ 的 RNA 合成 cDNA。
5. 转录能力强:可合成长达 12 kb 的 cDNA。
6. 转录速度快:最快 5 min 内可完成反转录反应。

产品组成
组分 规格
4X Evo Super M-MLV Plus cDNA Synthesis Mix*1 250 μl
Random 6 mers Primer (100 μM)*2 100 μl
RNase free water 1 ml X 2 pcs

*1:含有 Evo Super M-MLV 、RNase Inhibitor、Oligo dT(18T) Primer、dNTP Mixture 及反应 Buffer。
*2:在不含 poly(A) 的 RNA 起始 cDNA 的合成、Real Time PCR 用的 cDNA 的合成及 RNA 全部区域 cDNA 的均匀合成等情况下,此组分需添加至反应液中。

保存与运输
保存温度:-20℃保存
运输温度:干冰运输或-20℃冰袋运输

1. 以不同样本 RNA 为模板,使用本产品进行反转,反转温度为 55℃,反转后使用 2X L-Exp Taq Master Mix(Code No. AG11417)扩增不同长度的片段,均能得到较好的扩增效果。
电泳结果如下图所示:

2. 以 Mouse Heart RNA 为模板(模板量为 1 μg),使用本产品在不同温度下(42℃、45℃、50℃、55℃、60℃)进行反转,反转后使用 2X L-Exp Taq Master Mix(Code No. AG11417)扩增 4 kb 片段,结果表明:本产品在 42℃ ~ 60℃ 温度范围内均能进行反转扩增,推荐最适反转温度为 55℃
电泳结果如下图所示:

3. 以 293T 细胞 Total RNA 为模板,使用本产品进行一步法 RT-PCR 扩增 537 bp 片段。模板添加量为 5 μg、2 μg、1 μg、100 ng、10 ng、1 ng、100 pg、10 pg、1 pg,检测灵敏度可达到 1 pg。
电泳结果如下:

4. 以 293T Total RNA(100 ng ~ 1 pg)为模板,使用本产品进行反转,反转产物搭配 SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit(Code No. AG11701)进行定量检测,扩增 Human GAPDH 基因。所用定量仪器为ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。实验结果如下:

结果如上图所示:
1、不同浓度的模板在 45 cycles 以内均能获得良好的扩增。
2、扩增效率为 98.9%,R2=0.9992。
3、熔解曲线峰型单一、无杂峰,扩增特异性强。