本产品是针对 illumina 高通量测序平台开发的基于 CUT & Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)技术原理研究蛋白质与 DNA 互作的试剂盒。相较于传统的 ChIP-seq 技术,本产品无需进行传统的超声打断、接头连接等繁琐步骤,操作更加简单,具有实验周期短、细胞投入量低、抗体投入量少、文库收量高、信噪比高等特点,适用于胚胎发育、干细胞、肿瘤发生等各种表观遗传学领域的研究。
CUT & Tag 是一种新型的研究 DNA -蛋白质互作的方法,使用了与 Protein A/G 融合的 Tn5 转座酶,在 Protein A/G 引导下精准的与抗体结合,使得 Tn5 转座体能够靶向到目的位点进行酶切反应,同时给切下的 DNA 加上二代测序所必须的部分接头序列,再经过 DNA 提取后进行PCR 扩增及纯化即可获得用于测序的文库,经测序即可获得靶标位点的 DNA 信息。
本产品的反应体系经过了精心优化,实验中所有试剂请使用本产品中提供的,不建议改变任何反应组分或用其他的等效产品替换本产品中组分,以免获得不好的实验结果。如需替换,请先进行验证。
1. 适用于 illumina 测序平台:整合了 illumina 接头,构建的 DNA 文库可直接进行 NGS 测序。
2. 细胞范围兼容性广:可从 100~105 个细胞起始量进行实验。
3. 信噪比高:背景噪声信号低,实验重复性好。
4. 操作简单:全程磁珠提取纯化,操作简单迅速。
5. pA/G-Transposome Mix 性能强:pA/G 结构域对兔、鼠等多种来源的抗体具有广谱的亲和性,靶向精准;优化的 Tn5 酶能够高效、准确切割靶 DNA。
6. 测序质量高:优化的 PCR 扩增体系,测序数据质量高。
Package 3-1 组分如下(-80℃ 保存):
组分 | AG12563 | AG12555 | AG12556 |
pA/G-Transposome Mix | 4 μl | 12 μl | 48 μl |
Package 3-2 组分如下(4℃ 保存):
组分 | AG12563 | AG12555 | AG12556 |
ConA Beads Pro | 20 μl | 60 μl | 240 μl |
DNA Clean Beads | 660 μl | 1 ml x 2 pcs | 8 ml |
10% SDS | 8 μl | 24 μl | 96 μl |
Package 3-3 组分如下(-20℃ 保存):
组分 | AG12563 | AG12555 | AG12556 |
Lysis Buffer | 400 μl | 1.2 ml | 1.2 ml X 4 pcs |
10X ConA Binding Buffer | 100 μl | 300 μl | 1.2 ml |
10X Wash Buffer | 1 ml | 1.6 ml x 2 pcs | 1.6 ml X 6 pcs |
5% Digitonin Solution | 28 μl | 80 μl | 320 μl |
10X Dig-300 Buffer | 220 μl | 660 μl | 1.2 ml X 2 pcs |
BE Buffer | 14 μl | 42 μl | 168 μl |
MgCl2 Solution | 8 μl | 24 μl | 96 μl |
Stop Buffer | 6 μl | 18 μl | 72 μl |
AccuNext PCR Mix Ⅱ | 80 μl | 240 μl | 960 μl |
Proteinase K(20 mg/ml) | 4 μl | 12 μl | 48 μl |
注意:AccuNext 转座体建库适配接头引物(Illumina)(Code No. AG12532 / AG12533 / AG12534)为实验必须试剂,但本产品中未配制,需要单独购买。AccuNext 转座体建库适配接头引物(Illumina)的信息见附录1。
Package 3-2 4℃ 保存(避免冻结)
Package 3-3 -20℃ 保存
运输温度:Package 3-1 干冰运输
Package 3-2 冰袋运输
Package 3-3 干冰或者-20℃ 冰袋运输