AccuNext CUT & RUN DNA 建库试剂盒(Illumina)

产品货号: AG12562 / AG12561

¥2,400¥6,000

产品描述

本产品是针对 Illumina 高通量测序平台定向开发的,基于 CUT & RUN ( Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease ) 技术原理研究蛋白质与 DNA 相互作用的试剂盒。本产品优化了实验反应体系和建库流程,与传统的 ChIP-Seq 相比,具有实验成功率高、抗体兼容性强、实验周期短、操作简单、信噪比高等优势,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤发生等表观遗传学研究领域。
CUT & RUN 是一种研究蛋白质 -DNA 相互作用的新方法,使用 Protein A/G 融合的 MNase 核酸酶,在抗体引导下精准靶向定位到目的蛋白,并在目的位点附近进行 DNA 的片段化切割,提取后的 DNA 可直接用于 DNA 文库构建,经测序后即可获得靶标位点的 DNA 信息。
本产品的反应体系经过了精心优化,实验中所有试剂请使用本产品中提供的,不建议改变任何反应组分或用其他的等效产品替换本产品中组分,以免获得不好的实验结果。如需替换,请先进行验证。

 

产品优势

1. 操作简单,单管式片段化、末端修复、加dA尾反应,显著缩短实验耗时。
2. DNA适用范围广,灵敏度高,100 pg ~ 1μg的起始量均可制备高质量文库。
3. 双链DNA随机片段化,序列偏好性低。
4. 优化的高保真酶体系,文库产量和质量显著提高。

 

产品组成

Package 2-1 组分如下(4℃ 保存):

组分 AG12562 AG12561
ConA Beads Pro 20 μl 60 μl
DNA Clean Beads 470 μl 1.5 ml
10% SDS 8 μl 24 μl

Package 2-2 组分如下(-20℃ 保存):

组分 AG12562 AG12561
Lysis Buffer 400 μl 1.2 ml
10X ConA Binding Buffer 100 μl 300 μl
10X Wash Buffer 700 μl 1 ml X 2 pcs
5% Digitonin Solution 8 μl 24 μl
10X Dig-300 Buffer 220 μl 660 μl
BE Buffer 14 μl 42 μl
pAG-Mnase 4 μl 12 μl
CaCl2 Solution 8 μl 24 μl
Stop Buffer 6 μl 18 μl
Proteinase K(20 mg / ml) 4 μl 12 μl
保存与运输
保存温度:Package 2-1 4℃保存(避免冻结)
Package 2-2 -20℃保存
运输温度:Package 2-1 冰袋运输
Package 2-2 干冰或者-20℃ 冰袋运输
实验示例

1、使用本产品对 K562 Cells 进行文库构建,细胞量是 104个,扩增循环数是 13,使用 H3K27me3 抗体,对文库进行 Agilent 2100 Bioanalyzer检测,结果文库峰型呈现典型的 Ladder 状分布,如下图所示:


图1:Agilent 2100 Bioanalyzer文库长度检测

2、使用本产品对不同的细胞量(1 X 10 4、1 X 10 5、5 X 10 5 Cells)K562 Cells 进行文库构建,使用 H3K27me3 抗体,结果显示不同细胞量均可获得较好的测序数据,TSS 富集以及 IGV 视图信噪比高,对目的基因位点有明显富集,如下图所示:


图2:TSS富集图


图3:chr2 IGV全局视图