Evo M-MLV 反转录试剂盒 II（含去除 gDNA 试剂, 用于 qPCR）

产品货号：AG11711

¥1,400

产品描述

本产品是利用 M-MLV 反转录聚合酶的反转录试剂盒，cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。本产品是在 Evo M-MLV RT Kit with gDNA Clean for qPCR（Code. AG11705）的基础上，将引物混合制成 RT Primer Mix， 方便使用，可减少实验误差。该试剂盒使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Clean Reagent，通过42 ℃, 2 min 即可除去基因组 DNA，有效的减少基因组 DNA 对 cDNA 的定量分析造成的影响 。 使用本制品合成得到的 cDNA 适用于嵌合法和探针法 qPCR 分析。

产品优势

① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reagent，能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中 RT Primer Mix 混有 Oligo dT (18T) Primer 和 Random 6 mers Primer，并对引物用量进行了优化，操作方便、减少实验误差。
③ 本制品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

产品组成
组分 规格
gDNA Clean Reagent 100 μl
5X gDNA Clean Buffer 200 μl
Evo M-MLV RTase Enzyme Mix *1 100 μl
5X RTase Reaction Buffer Mix I*2 400 μl
RT Primer Mix*3 100 μl
RNase free water 1 ml x 2 pc

*1：含有 Evo M-MLV  RTase 与 RNase Inhibitor。
* 2：含有 dNTP。
* 3：含有 Oligo dT (18T) Primer 与 Random 6 mers Primer。

保存与运输
保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋运输
示例一

向小鼠肝脏 Total RNA（分别为 2 μg、200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg）中分别加入 200 ng 的小鼠基因组 DNA，再使用本试剂盒去除基因组 DNA，去除基因组 DNA 后进行反转录实验，并以此 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（Code. AG11701）进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。

结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.995，扩增效率是 108.0%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例二

以不同梯度的 293T 细胞 Total RNA 为模板（2 μg~20 pg），用本试剂盒进行反转录，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（Code. AG11701）进行 qPCR 检测 Human H32F 基因。

结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.999，扩增效率是 96.4 %。
② 不加 RNA 但添加人基因组样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例三

使用本制品对 293T 细胞的 Total RNA 进行反转录，Total RNA 起始量 1 μg~100 pg。以反转录产物 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，利用探针法 qPCR 检测 Humanβ-actin 基因 （qPCR 使用 Pro Taq HS Premix Probe qPCR Kit, Code. AG11704 进行）。

结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.997，扩增效率为 103.1%；
②本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，1 μg ~ 100 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。

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