Klenow 片段（3’→5’exo-）

Klenow Fragment (3’→5′ exo-) 是大肠杆菌 DNA 聚合酶的大片段，经突变（D355A、E357A）失去了核酸外切酶活性。本产品具有 5′ → 3′ DNA 聚合酶活性，同时缺乏 5′ → 3′ 核酸外切酶活性和 3′ → 5′ 核酸外切酶活性，具有一定的链置换活性。本产品在补平末端时，常以非模板定向的方式在 3′ 末端添加一个或更多个额外核苷酸，因此不推荐其用于 DNA 末端平滑化反应。

组分	规格
Klenow Fragment (3’→5′ exo-)（5 U / μl）	40 μl
10X Klenow Fragment (3’→5′ exo-) Reaction Buffer	250  μl

 

保存温度：-20℃保存
运输温度：干冰运输或者 -20℃ 冰袋运输

对本产品进行性能检测，底物为 33 bp 的单端突出双链 DNA。其中 C1：dsDNA with 5’/ 3′ overhang；C2：AG12528 (本产品)；C3：competitor (竞品公司 Klenow Fragment exo-)；C4：AG12510 (AG Klenow Fragment)。
使用 15% 非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测，结果如下图所示：

图 A. dsDNA 5′ 突出末端聚合性能检测凝胶电泳图。每个样品酶添加量从左到右依次为 0.005 U、0.01 U 以及 0.02 U。结果显示，三种酶均发生了聚合反应，且随着酶量的升高聚能效果逐渐增强，三种酶聚合性能相当。

图 B. dsDNA 3′ 突出末端切除性能检测凝胶电泳图。每个样品酶添加量从左到右依次为 0.5 U、1 U 以及 2 U。结果显示 C4 发生了切除反应，而 C2 和 C3 没有发生切除反应，条带与未处理模板相当，证明本产品无外切酶活性。