miRNA cDNA第一链合成试剂盒 (含 gDNA 去除试剂，茎环法)

产品货号：AG11745

¥700

产品描述

本产品是利用茎环法合成 miRNA 第一链 cDNA 的反转录试剂盒。产品中的 5X gDNA Clean Reaction Mix II 在42℃ 2 min 条件下可有效去除 RNA 中残留的基因组 DNA（gDNA），提升结果准确性。本产品适用于 Total RNA 或 Small RNA 等包含 miRNA 样品的反转录。使用本产品合成得到的 cDNA 适合用于嵌合法 qPCR 分析，推荐搭配本公司产品 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II（Code. AG11702）；若对消除引物二聚体有较高的需求，可搭配 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 Ⅳ （Code. AG11746），以获得较优的实验结果。

产品优势

① 5X gDNA Clean Reaction Mix II 含有 gDNA 去除试剂，能够快速去除 RNA 模板中残留的 gDNA。
② 本产品可对 Total RNA 或 Small RNA 等包含 miRNA 的样品进行反转录。
③ 经本产品反转得到的 cDNA，可实现对成熟 miRNA 的精确定量，具有较高的灵敏度和特异性。

产品组成
组分 规格
5X gDNA Clean Reaction Mix II 100 μl
5X miRNA RT Buffer (Stem-loop)*1 200 μl
miRNA RT enzyme mix (Stem-loop) *2 100 μl
RNase free water 1 ml

*1：含有 dNTP。
*2：含有 Evo M-MLV RTase 与 RNase Inhibitor。

保存与运输
保存温度：-20℃保存
运输温度：干冰运输或-20℃冰袋运输。
示例一

向小鼠肝脏 Total RNA（分别为 200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、0 pg）中加入 200 ng 的小鼠 gDNA，使用本产品去除 gDNA（下图中红色曲线）。同时，将本产品中 5X gDNA Clean Reaction Mix II 失活处理作为 gDNA 对照组（下图中绿色曲线）。然后进行反转录实验，并以反转得到的 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（ AG11701）进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH。所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
1、工作曲线 R2=1.0000，扩增效率是 106.2%。
2、本产品能有效去除 RNA 中残留的 gDNA，获得的熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。
3、本产品反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，200 ng ~ 200 pg RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈良好的线性关系。

示例二

以小鼠肝脏 Total RNA（分别为 1 μg 、100 ng、10 ng、1ng、100 pg、0 pg）为模板，使用本产品进行反转录实验，并以反转得到的 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II（ AG11702）进行 qPCR 扩增检测小鼠的 rno-miR-802-5p。
所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
1、工作曲线 R2=0.9945，扩增效率是 100.4%。
2、在 1 μg ~ 100 pg RNA 浓度范围内的扩增曲线呈现良好的线性关系。
3、熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

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