本产品是用于体外转录获得 sgRNA 的试剂盒，包含 PCR 扩增试剂（用于扩增体外转录用模板 dsDNA）与体外转录试剂两部分。以 Cas9 特异性识别的骨架序列为模板，使用专门设计的上游特异引物（包含有 T7 启动子序列、目的基因特异序列及骨架部分重叠序列），在 DNA 聚合酶的作用下生成 dsDNA，再以此 dsDNA 为模板（扩增的模板可直接用于转录，无需纯化），通过 T7 RNA 聚合酶，可合成 20 μg 左右具有功能的 sgRNA。
CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是在许多细菌和古细菌中发现的基因组位点，CRISPR / Cas9 系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒及外源 DNA。研究发现，CRISPR / Cas9 可作为基因编辑技术对细胞的 DNA 靶向位点进行特异性切割，在细胞对损伤修复时可能会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组 DNA 进行修饰的目的。
Cas9(CRISPR-associated protein 9)是一种双链 DNA 内切酶；sgRNA(Single Guide RNA)包含 2 部分，由结合特定 DNA 靶标的 20 个核苷酸的 crRNA (CRISPR RNA)序列以及结合 Cas9 蛋白的 tracrRNA（transactivating crRNA）序列组成的单链 RNA。当含有 20 nt 目标序列的 sgRNA 与具有双链 DNA 内切酶活性的 Cas9 蛋白结合时，形成活性核糖核蛋白(RNP)将对目标 DNA 双链进行特异性的切割，导致 DNA 双链断裂。
| 组分 | 规格 |
| 2X ApexHF FS PCR Master Mix | 625 μl X 2 pcs |
| Scaffold Template ( 2 ng / μl ) *1 | 250 μl |
| Control sgRNA Oligo（10 μM）*2 | 5 μl |
| In Vitro Transcription Buffer | 875 μl |
| RNase Inhibitor ( 40 U / μl ) | 62.5 μl |
| T7 RNA polymerase (100 U / μl ) | 125 μl |
| DNase I ( RNase free ) (5 U / μl ) | 100 μl |
| 2X RNA Loading Dye | 250 μl |
| RNase free water | 1 ml X 2 pcs |
*2：Control sgRNA Oligo 为对照 sgRNA 上游引物。
保存温度：-20℃保存
运输温度：-20℃冰袋运输或干冰运输
