AccuNext Small RNA 文库制备试剂盒(Illumina)

产品货号:AG12511 / AG12512

¥6,800¥20,800

产品描述
本产品是针对 illumina 高通量测序平台设计的 Small RNA 测序文库制备试剂盒,可从 1 ng~2 μg Total RNA(含有 Small RNA)或 1 ng~1 μg 富集的 Small RNA 起始制备Small RNA 测序文库,用于分析多种小 RNA(包括 miRNA、piRNA、snoRNA 和 snRNA等)。利用 Poly (A) Polymerase 在 RNA 3’末端加上 Poly (A) 尾,再用带有特定接头的 Oligo (dT) 引物进行反转录,利用反转录酶的末端转移酶活性,在 cDNA 末端加上特定接头。搭配 illumina 测序接头的引物进行 PCR 扩增【例如,AccuNext 双端标签接头引物 (CDI, Illumina)(Code No. AG12505、AG12506、AG12507)】,通过磁珠分选,获得 150 bp ~ 350 bp 适用于 illumina 测序平台的 Small RNA 测序文库。
本产品操作简单,无需进行接头连接等繁琐的步骤,即可添加 illumina 测序接头和index 序列,获得 Small RNA 测序文库;优化的反应体系,提高了文库转化效率,能兼容不同的模板量,获得的测序结果稳定。
本产品中包含 RNA 3’末端加 Poly (A) 尾、逆转录(RT)和 PCR 扩增所需的所有组分,反应体系经过了精心优化,实验中所有试剂请使用本产品中组分,不建议改变任何反应组分的用量及浓度或用其他等效产品替换,以免获得不好的结果。如需替换,请先进行验证。
产品优势
1. 适用于 Illumina 测序平台:整合了 Index 和 Illumina 接头,构建的 small RNA 文库可直接进行 Illumina 高通量测序平台测序。
2. 模板适用范围广:能够从 1 ng~2μg Total RNA(含有 Small RNA)或 1 ng~1μg 富集的 Small RNA 中分析多种 Small RNA,包括 miRNA、piRNA、snoRNA 和 snRNA等。
3. 偏好性低、操作简单,无需进行接头连接等繁琐的步骤,即可添加 illumina 接头和index 序列,获得 Small RNA 测序文库,避免通过接头连接带来的偏好性。
产品组成

Package 2-1组分如下(-80℃保存):

组分 AG12511 (12 rxns) AG12512 (48 rxns)
Control micRNA (2.5 ng / μl) 5 μl 5 μl
smRNA Adapter Mix Solution 78 μl 312 μl

Package 2-2 组分如下(-20℃保存):

组分 AG12511 (12 rxns) AG12512 (48 rxns)
Poly(A) Polymerase (0.5 U / μl) 12 μl 48 μl
4X Poly(A) Reaction Buffer 30 μl 120 μl
RNase Inhibitor ( 40 U / μl ) 9 μl 36 μl
3’smRNA dT Primer 12 μl 48 μl
AccuNext Reverse Transcriptase( 100 U / μl ) 24 μl 96 μl
2X AccuNext PCR Buffer 600 μl 1.2 ml X 2 pcs
AccuNext DNA Polymerase ( 1 U / μl ) 24 μl 96 μl
Nuclease free water 1 ml X 2 pcs 1 ml X 5 pcs
Tris Buffer(5 mM) 900 μl 1.2 ml X 3 pcs
保存与运输
保存温度:Package 2-1 -80℃保存         Package 2-2 -20℃保存
运输温度:Package 2-1 干冰运输           Package 2-2 -20℃冰袋运输或干冰运输
实验例1

采用本产品进行鼠肝 Total RNA 文库构建,RNA 模板添加量为 100 ng,PCR 扩增循环数为 15,文库产物经纯化及分选后结果如下:图 6-A 显示了扩增后的文库产物,分布均匀,峰值在 150 ~ 350 bp 之间。图 6-B 为无模板的阴性对照。

 

实验例2

使用鼠肝 Total RNA 和鼠肝 Small RNA 为模板,用本产品进行文库构建,使用 Illumina NovaSeq 6000 系统测序,数据如下:

 

实验例3

以 100 ng 的鼠肝 Small RNA 和鼠肝 Total RNA 为模板,用本产品进行 Small RNA 文库构建,使用 Illumina NovaSeq 6000 系统测序,结果表明实验重复性好(图 7-A 为鼠肝 small RNA 100 ng、图 7-B 为鼠肝Total RNA 100 ng)。