AccuNext 链特异性 RNA 文库制备试剂盒（Illumina）

产品货号：AG12503 / AG12504

¥6,000 – ¥16,000

产品描述
本产品是针对 Illumina 高通量测序平台研发的链特异性 RNA 文库构建试剂盒，可对 100 pg ~ 100 ng 的 RNA 样本进行 RNA 文库构建，包含 RNA 片段化、逆转录 ( RT )和 PCR 文库扩增所需的所有组分。本产品通过加热使 RNA 片段化，然后以带接头序列的 3′-N6 Primer 进行反转录，依靠反转录酶的模板转换活性 (Template-switching)，在 RNA 5′ 端添加一段接头序列，产生两端带有接头序列的 cDNA；搭配 AccuNext 双端标签接头引物（CDI, Illumina）（Code. No AG12505、AG12506、AG12507）进行 PCR 扩增即可获得适用于 Illumina 测序平台的测序文库。
本产品操作简单，无需进行传统的末端修复、接头连接等繁琐的步骤，即可获得 RNA 测序文库；优化的反应体系，提高了文库转化效率，能兼容不同的模板量，测序获得的数据均一性高，覆盖度完整；同时，模板转换反应的方向性保留了 RNA 的链方向性，可获得 RNA 链特异性的测序数据。
由于 Total RNA 中 rRNA 占比近 90%，为了测序时获得更多有效的数据量及降低测序成本，建议去除 rRNA 后再进行 RNA 文库构建，以减少测序中 rRNA 的数据占比，获得更多有效的数据。
产品的反应体系经过了精心优化，请使用本产品中提供的试剂进行 RNA 片段化、逆转录和 PCR 文库扩增实验，建议不改变任何反应组分的用量及浓度，或用其他的等效产品替换本产品中组分，以免获得不好的结果。如需替换，请先进行验证。
产品优势
1. 适用于 Illumina 测序平台：整合了 Index 和 Illumina 接头，构建的 RNA 文库可直接进行 NGS 测序。
2. 模板适用范围广：可对 100 pg ~ 100 ng RNA 进行 RNA 文库构建；可兼容真核及原核生物 RNA 样本；降解的 RNA 也可以成功建库，兼容 RIN 值 2 ~ 10 的 RNA 样本。
3. 操作简单：无需进行传统的末端修复、接头连接等繁琐的步骤，即可获得 RNA 测序文库。
4. 能准确识别 RNA 链特异性：Read 1 读取的是原始 RNA 的反义链序列，Read 2 读取的是原始 RNA 的正义链序列；
5. 产品性能稳定：实验操作可重复。
产品组成

Package 2-1 组分如下（-80℃ 保存）：

组分 AG12503 AG12504
Control Total RNA*（1 μg / μl） 20 μl 20 μl
5′-Adapter Primer Mix 54 μl 216 μl

*：Control Total RNA 为 Mouse Liver Total RNA。

Package 2-2 组分如下（-20℃ 保存）：

组分 AG12503 AG12504
RNase Inhibitor（40 U / μl） 6 μl 24 μl
3′-N6 Primer 12 μl 48 μl
5X First-Strand Buffer 48 μl 192 μl
AccuNext Reverse Transcriptase（100 U / μl） 24 μl 96 μl
AccuNext DNA Polymerase（1 U / μl） 12 μl 48 μl
2X AccuNext PCR Buffer 300 μl 1.2 ml
Nuclease free water 1 ml 1 ml x4 pcs
保存与运输
保存温度：Package 2-1 -80℃保存           Package 2-2 -20℃保存
运输温度：Package 2-1 干冰运输             Package 2-2 -20℃冰袋运输或干冰运输
示例一

使用本公司产品 SteadyPure Mag mRNA 纯化试剂盒（磁珠法） (Code. NoAG21204 )纯化 mRNA。采用本产品进行 293T Cell mRNA 文库构建，RNA 模板添加量为 100 pg，PCR 扩增循环数为 19，按照 1.0X 磁珠量（磁珠∶反应液= 1∶1）进行所有纯化。结果如下：图 3-A 显示了扩增后的文库产物，分布均匀，峰值在 200 ~ 700 bp 之间。图 3-B 显示无模板的阴性对照中没有产物。


图3. Agilent 2100 生物分析仪检测结果

示例二

以纯化的 293T Cell mRNA 为模板，用本产品进行文库构建，使用 Illumina NovaSeq 6000 系统测序，数据如下。

表 1. 主要 mRNA-Seq 数据

示例三

以不同浓度（100 pg 和 10 ng）的 293T Cell mRNA 为模板，用本产品进行反转及文库构建，分别做 2 个技术重复，使用 Illumina NovaSeq 6000 系统测序，2 个技术重复结果的基因表达相关性很高，表明实验重复性好（图 4：A 为 100 pg、B 为 10 ng）


图 4. 基因表达重复性分析

示例四

以 293T Cell mRNA 的 100 pg 和 10 ng 为模板，用本产品进行反转及文库构建，使用 Illumina NovaSeq 6000 系统测序，测序后分析测序片段在基因上的分布，结果显示用本产品扩增的片段无 5′ 端和 3′ 端的偏好性，分布均一（图 5：A 为293T Cell mRNA 100 pg、B 为 293T Cell mRNA 10 ng ）。


图 5. 测序数据在基因上的覆盖度

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