Hoechst 33258 染色液

本产品是基于 Hoechst 33258【4-(5-(4-甲基哌嗪-1-基 )-1H,1’H-[2,5′-联苯并[D]咪唑]-2′-基 )苯酚】的荧光染料，广泛应用于细胞成像技术中 DNA 和细胞核染色。其检测原理是 Hoechst 33258 能够渗透细胞膜与 dsDNA 的腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）小沟处结合，从而对细胞核染色。Hoechst 33258 本身荧光背景较低，与 dsDNA 结合后发出强烈的蓝色荧光（最大激发光与发射光分别为 Ex = 352 nm， Em = 461 nm）。Hoechst 33258 染色常用于细胞凋亡检测、普通的细胞核染色或常规的 DNA 染色，染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。本产品操作简单，仅需将 Hoechst 33258 溶液稀释至合适浓度后覆盖样本，孵育一定时间后即可观察到明亮的蓝色荧光。
本产品可广泛用于活细胞、固定细胞或组织、石蜡切片的细胞核染色、细胞凋亡和细胞周期分析；由于 Hoechst 33258 对活细胞的细胞膜渗透性较差，因此对健康的活细胞染色时蓝色荧光强度较弱，对于凋亡细胞或者细胞膜受损伤的细胞，则会发出明亮的蓝色荧光；若对健康的活细胞染色时需要有明亮的蓝色荧光，可使用 Hoechst 33342 Solution（Code No. AG51012）。

1. 本产品是即用型染料，操作简单，染色固定细胞或石蜡切片样本时可用 PBS 或细胞培养液将其稀释至工作浓度（0.5 ~ 10 μg / ml），加入至细胞中，室温孵育一定时间后即可观察；染色活细胞时，该溶液可直接按照一定比例加至细胞培养液中，无需收集细胞，也无需洗涤细胞，37℃ 孵育一定时间后即可观察。
2. 本产品可渗透细胞膜，对细胞毒性较低，适用于活细胞、固定细胞或组织、石蜡切片等多种样本的细胞核染色实验以及细胞凋亡检测。
3. 酚红和血清对 Hoechst 33258 染色无影响。

用适量的 4% 多聚甲醛固定液室温固定 1×10⁶ 个 Jurkat，离心去除固定液后加入适量的 PBS 洗涤两遍，然后用 10 μg / ml 的 Hoechst 33258 染色工作液进行染色，结果如下图所示，细胞核呈现蓝色荧光。

用 1 ml 的 Hoechst 33258 染色工作液（10 μg / ml）染色 1×10⁶ 个 Jurkat 活细胞，37℃ 孵育 10 min，结果如下图所示，活细胞荧光强度较暗，早期凋亡细胞呈现亮蓝色（红色箭头所指为正常活细胞，白色箭头所指为凋亡细胞）。