InMap 染色体步移试剂盒

本产品是根据基因组 DNA 上已知序列获得其侧翼未知序列的试剂盒，在 TAIL-PCR (Thermal Asymmetric Interlaced PCR，热不对称交错 PCR）原理的基础上进行改进。该方法相对其他传统染色体步移的方法（如反向 PCR、连接接头法等）具备高效、高特异性、高灵敏度、操作简便等特点。
分别使用试剂盒中提供的 4 条兼并引物，即 TP Primer 1（TP1）、TP Primer 2（TP2）、 TP Primer 3（TP3）、TP Primer 4（TP4），搭配根据已知序列设计出的特异性引物 Specific Primer 1（SP1）、Specific Primer 2（SP2）、Specific Primer 3（SP3）进行热不对称 PCR扩增，经过三轮 PCR 扩增后便可获得已知序列的侧翼序列，如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。
本产品搭配具有性能优越的 L-Exp Taq HS DNA Polymerase，具有扩增长片段或高 GC含量等复杂片段扩增能力，该酶搭配精心优化的 Buffer 体系，使反应具有较高的特异性，同时在保证扩增成功率的情况下又能获得较长的目的序列。
本产品提供了 Control Template 及 Control Specific Primer，方便进行对照实验。

组分	规格
L-Exp Taq HS DNA Polymerase（5 U / µl）	25 μl
5X L-Exp Taq PCR Buffer（Mg2+ plus）	500 μl
dNTP Mix（10 mM each）	100 μl
TP Primer 1（100 µM）	30 μl
TP Primer 2（100 µM）	30 μl
TP Primer 3（100 µM）	30 μl
TP Primer 4（100 µM）	60 μl
Control Template（200 ng / µl）	10 μl
Control Specific Primer 1（10 µM）	10 μl
Control Specific Primer 2（10 µM）	10 μl
Control Specific Primer 3（10 µM）	10 μl

 

保存温度：-20℃ 保存
运输温度：干冰运输或 -20℃ 冰袋运输

以 Control Template 为模板，利用本产品中 TP Primer 4 获取鼠基因组中的 ApoE 基因 5′ 序列，电泳结果显示经三轮 PCR 后，扩增得到相对较为单一的目的条带。

（1）第一轮 PCR

①配制反应液：

②反应条件：
参考“操作方法”中的 1. 第一轮 PCR 反应程序，其中退火温度选择 65℃，延伸时间选择 2 min。

（2）第二轮 PCR

①配制反应液：

②反应条件：
参考“操作方法”中的 2. 第二轮 PCR 反应程序，其中退火温度选择 65℃，延伸时间选择 2 min。

电泳结果如下图所示：

（4）产物分析及回收

使用 SteadyPure DNA 凝胶回收试剂盒（Code No.AG21005）对第三轮 PCR 扩增产物进行切胶回收，然后使用 Control Specific Primer 3 进行 DNA 测序；
测序结果显示，获取的 5 kb DNA 片段包含鼠基因组中的 ApoE 基因 5’端序列。