miRNA cDNA 第一链合成预混液（茎环法）

产品货号：AG11748

¥700

产品描述

本产品是利用茎环法合成 miRNA 第一链 cDNA 的反转录试剂盒。本产品针对反应体系进行了优化，5X miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Premix (Stem-loop) 中含有反转录反应所需的 Buffer 与 M-MLV，只需加入茎环引物、RNA 模板与水即可直接进行反应，使用方便，可有效减少试剂损失及实验误差，缩短操作时间。本产品适用于 Total RNA 或 Small RNA 等包含 miRNA 样品的反转录。使用本产品合成得到的 cDNA 适合用于嵌合法 qPCR 分析，推荐搭配本公司产品 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II（Code. AG11702）；若对消除引物二聚体有较高的需求，可搭配 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 Ⅳ （Code. AG11746），以获得较优的实验结果。

产品优势

①本产品为预混型产品，反应液配制十分简单，仅需加入茎环引物、RNA 模板与水即可直接进行反应。
②本产品可对 Total RNA 或 Small RNA 等包含 miRNA 的样品进行反转录。
③经本产品反转得到的 cDNA，可实现对成熟 miRNA 的精确定量，具有较高的灵敏度和特异性。

产品组成
组分 规格
5X miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Premix（Stem-loop） 200 μl
RNase free water 1 ml

 

保存与运输
保存温度：-20℃保存
运输温度：干冰运输或-20℃冰袋运输。
示例一

以小鼠肝脏 Total RNA（分别为 1 μg 、100 ng、10 ng、1ng、100 pg、10 pg、0 pg）为模板，使用本产品进行反转录实验，并以反转得到的 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II (Code. AG11702) 进行 qPCR 扩增检测小鼠的 mmu-miR-29a-3p。
所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
1、工作曲线 R2=0.9992，扩增效率是 92.6%。
2、在 1 μg ~ 10 pg RNA 浓度范围内的扩增曲线呈现良好的线性关系。
3、熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例二

以小鼠肝脏 Total RNA（分别为 1 μg 、100 ng、10 ng、1 ng 、100 pg、10 pg、1pg、0pg）为模板，使用本产品进行反转录实验，并以反转得到的 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II (Code. AG11702)进行 qPCR扩增检测小鼠的 tRF RNA-mmu_tsr000557。
所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
1、工作曲线 R2=0.9985，扩增效率是 103.9%。
2、在 1 μg ~1 pg RNA 浓度范围内的扩增曲线呈现良好的线性关系。
3、熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例三

以 293T Total RNA（分别为 1 μg 、100 ng、10 ng、1 ng 、100 pg、10 pg 、0pg）为模板，使用本产品进行反转录实验，并以反转得到的 cDNA 为模板，取 2 μl的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒 II (Code. AG11702)进行 qPCR 扩增检测人的 miR-221-3p。
所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
1、工作曲线 R2=0.9991，扩增效率是 92.7%。
2、在 1 μg ~ 10 pg RNA 浓度范围内的扩增曲线呈现良好的线性关系。
3、熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

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