OK Clon DNA 连接试剂盒

产品货号:AG11802 / AG11803

¥480¥2,200

产品描述

OK Clon DNA Ligation Kit 是一种准确、快速、高效的定向克隆试剂盒。本试剂盒可以在 10 分钟内,快速高效地将一段或多段 DNA 片段定向、无缝的克隆到任意载体的任意位置,而不被酶切位点限制。DNA 连接反应是基于OK Clon Enzyme 3’- 5’ 端的外切酶活性,从线性化 DNA 链的 3’ 末端切割核苷酸形成粘性末端,由此,片段与载体末端能够形成 15 ~ 20 bp 的互补序列,通过退火可以准确、高效的将片段与载体连接。只需在设计引物时将与载体 5’ 端互补的序列添加在引物 5’ 端,通过该引物扩增目的片段,无需对 PCR 片段进行限制酶切、磷酸化等处理,就可将目的片段插入载体中。

产品组成
组分 AG11802 AG11803
5X OK Clon Master Mix 20 μl 100 μl
Linearized Control vector(50 ng / μl) 5 μl 5 μl
2 kb Positive Control Insert(80 ng / μl) 5 μl 5 μl
保存与运输

保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋

示例一

本试剂盒中载体与片段的克隆实验
① 按照下表配制反应体系:

组分名称 实验组 阴性对照 阳性对照*1
5 X OK Clon Master Mix 2 μl 2 μl 2 μl
Linearized Control vector(50 ng / μl) 1 μl 1 μl /
2 kb Positive Control Insert(80 ng / μl) 1 μl / /
RNase free water 4 μl 5 μl Up to 10 μl

*1:阳性对照仅加入 100 pg 环状的 pUC19 质粒。不加线性化载体与片段。

② 将所有组别转化至 E.coli JM109 Competent cells(Code. AG11805),培养的菌悬浮液稀释 5 倍后,100 μl 涂布平板。结果如下图所示,实验组的菌落均匀,得到数百个单克隆菌落。

③ 挑取实验组 12 个单菌落,进行菌落 PCR 验证。从下图电泳结果可看出,所挑取 12 个菌落均为阳性菌落。

④ 将菌落 PCR 验证为阳性的 12 个菌落进行质粒提取后测序,序列正确无误。