SinGuiD sgRNA 体外筛选试剂盒

产品货号:AG51102

¥1,000

产品描述

本产品是一款体外筛选 sgRNA 的试剂盒,可用于体外验证 sgRNA(与 Cas9 搭配)的切割效率。利用 PCR 扩增含有 sgRNA 靶向位点的 DNA 模板,纯化后的靶向 DNA 可被 sgRNA 与 Cas9 蛋白复合体切割,可通过琼脂糖凝胶电泳检测 Cas9 与 sgRNA 复合体的切割效率。本产品仅包含切割实验所需的 Cas9 试剂,不包含 PCR 扩增试剂及 DNA 纯化试剂。整个切割实验能够在 2 小时内完成,为快速筛选有效靶点提供了便利工具。
CRISPR / Cas9 是一项突破性的基因组编辑技术,以其高效、易操作、便捷的特性,极大地方便了基因编辑实验,为生物的基因敲除、敲入、突变提供了有力的新工具。Cas9 (CRISPR-associated protein 9)是一种双链 DNA 内切酶,sgRNA(Single Guide RNA)可与 Cas9 结合形成活性核糖核蛋白(RNP),引导 Cas9 核酸酶到达 DNA 靶点进行切割,导致 DNA 双链断裂,在细胞对损伤修复时可能会造成基因敲除或敲入等,最终达到对基因组 DNA 进行修饰的目的。
根据靶基因可以设计多条 sgRNA,但不同的 sgRNA 介导的 Cas9 对 DNA 的切割效率不一致,虽然可以在设计 sgRNA 时,通过生物信息学对 Cas9 靶点的非特异性切割(脱靶)进行预测,但是并不能代表实际的切割效率。因此在利用 CRISPR/Cas9 建立基因敲除或敲入生物前可先在体外对 sgRNA 进行效率验证,选取能够介导更高切割效率的 sgRNA,可以显著节省整体实验时间、减少工作量及提高基因编辑成功率。

产品组成

Package 2-1组分如下(-80℃保存):

组分 规格
Control sgRNA(160 ng / μl) *1 10 μl

Package 2-2 组分如下(-20℃保存):

组分 规格
10X Cas9 Digestion Buffer 150 μl
Cas9 Nuclease,S.pyogenes(160 ng / μl) 225 μl
Control DNA Fragment(50 ng / μl) *2 20 μl
RNase free water 1 ml X 2 pcs
*1,*2:分别为对照靶向 DNA 片段和对照 sgRNA,可作为阳性对照。
保存与运输

保存温度:
Package 2-1 -80℃保存
Package 2-2 -20℃保存
运输温度:
Package 2-1 干冰运输
Package 2-2 -20℃冰袋运输或干冰运输

实验例

使用 160 ng 对照 Control sgRNA 与 720 ng Cas9 Nuclease,S.pyogenes 孵育,切割 200 ng 的 Control DNA Fragment(716 bp);可形成两个长度分别为 447 bp 和 269 bp 的 DNA 片段。电泳结果如下图所示: