Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒( 含去除 gDNA 试剂, 用于 qPCR )Ver.2

产品货号:AG11728

¥1,500

产品描述

本产品是利用 M-MLV 反转录酶的反转录试剂盒,cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2 中包含反转录反应所需的所有组分,并针对 Oligo dT (18T) Primer、Random 6 mers Primer 用量进行了优化,使反转录产物兼容嵌合法和探针法 qPCR 分析,能够进行高效的基因表达分析。

在进行下游定量 PCR 实验中,Total RNA 中混入的 gDNA 可直接作为 PCR 反应的模板进行扩增,可能会造成实验结果的假阳性;本制品中 gDNA Clean Reaction Mix Ver.2 可有效去除残留的基因组 DNA,确保定量结果的准确性;同时,本制品中配有 NRT Control Reaction Mix,可用于配制无反转录酶的阴性对照反应。

Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒(含去除 gDNA 试剂,用于 qPCR)Ver.2 是在原有 Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒(含去除 gDNA 试剂,用于 qPCR)的基础上进行优化升级,适用于不同的操作方法,客户可以根据需求进行选择:
方法一:两步法(先去除 gDNA,再进行反转录):若提取的 RNA 中 gDNA 残留过多或对 gDNA 去除效果要求更高,建议使用此方法。
方法二:All in one(去除 gDNA 与反转录反应在一管中同时进行):当 RNA 质量较高(gDNA 残留少),或反应中 RNA 浓度较高、目标基因拷贝数高时,可选用此方法,操作简便、快捷,可简化实验操作步骤,缩短实验时长。

产品优势

① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reaction Mix Ver.2,能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中将去除基因组及反转录体系分别配制成预混液,使用方便,可减少试剂损失及实验误差。
③ 适用于不同的操作方法,客户可以根据需求进行选择:既可选择两步法,先去除 gDNA,再进行反转录;也可选择 All in one,在一管中同时完成去除基因组与反转录反应,操作方便快捷。
④ 本制品反转得到的 cDNA 同时适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

产品组成
组分 规格
gDNA Clean Reaction Mix Ver.2 240 μl
5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2*1 400 μl
NRT Control Reaction Mix*2 80 μl
RNase free water 1 ml x 2 pc

*1:该溶液含有 Evo M-MLV RTase、RNase Inhibitor、dNTPs、Oligo dT (18T) Primer 与 Random 6 mers Primer。
*2:该溶液不含 Evo M-MLV RTase,其余组分与 5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2 完全相同。

保存与运输
保存温度:-20℃
运输温度:干冰或者 -20℃ 冰袋运输
示例一

向 293T Cell Total RNA(分别为 200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg)中分别加入 200 ng 的 Human 基因组 DNA,使用本试剂盒去除基因组 DNA,然后进行反转录实验(方法一:两步法的体系1),并以此 cDNA 为模板,取 2 μl 的 cDNA 原液,用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测 Human 的 Actin 基因。

所用定量仪器:ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下:

结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.9987,扩增效率是 101.4%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品中,Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,200 ng ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。

示例二

使用本试剂盒对 293T cell Total RNA 进行反转录(方法二:All in one),Total RNA 起始量 1 μg~1 pg。以反转录产物 cDNA 为模板,取 2 μl 的 cDNA 原液,用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。

所用定量仪器:ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下:

结果如上图所示:
① 工作曲线 R2=0.9959,扩增效率是 106.7%。
② 本制品的反转效率高,能在宽广的模板范围内进行准确的定量,1 μg ~ 1 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
③ 熔解曲线峰型单一,扩增特异性好。