Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒（ 含去除 gDNA 试剂, 用于 qPCR ）Ver.2

产品货号：AG11728

¥1,500

产品描述

本产品是利用 M-MLV 反转录酶的反转录试剂盒，cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2 中包含反转录反应所需的所有组分，并针对 Oligo dT (18T) Primer、Random 6 mers Primer 用量进行了优化，使反转录产物兼容嵌合法和探针法 qPCR 分析，能够进行高效的基因表达分析。

在进行下游定量 PCR 实验中，Total RNA 中混入的 gDNA 可直接作为 PCR 反应的模板进行扩增，可能会造成实验结果的假阳性；本制品中 gDNA Clean Reaction Mix Ver.2 可有效去除残留的基因组 DNA，确保定量结果的准确性；同时，本制品中配有 NRT Control Reaction Mix，可用于配制无反转录酶的阴性对照反应。

Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒（含去除 gDNA 试剂，用于 qPCR）Ver.2 是在原有 Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒（含去除 gDNA 试剂，用于 qPCR）的基础上进行优化升级，适用于不同的操作方法，客户可以根据需求进行选择：
① 方法一：两步法（先去除 gDNA，再进行反转录）：若提取的 RNA 中 gDNA 残留过多或对 gDNA 去除效果要求更高，建议使用此方法。
② 方法二：All in one（去除 gDNA 与反转录反应在一管中同时进行）：当 RNA 质量较高（gDNA 残留少），或反应中 RNA 浓度较高、目标基因拷贝数高时，可选用此方法，操作简便、快捷，可简化实验操作步骤，缩短实验时长。

产品优势

① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reaction Mix Ver.2，能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中将去除基因组及反转录体系分别配制成预混液，使用方便，可减少试剂损失及实验误差。
③ 适用于不同的操作方法，客户可以根据需求进行选择：既可选择两步法，先去除 gDNA，再进行反转录；也可选择 All in one，在一管中同时完成去除基因组与反转录反应，操作方便快捷。
④ 本制品反转得到的 cDNA 同时适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

产品组成
组分 规格
gDNA Clean Reaction Mix Ver.2 240 μl
5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2*1 400 μl
NRT Control Reaction Mix*2 80 μl
RNase free water 1 ml x 2 pc

*1：该溶液含有 Evo M-MLV RTase、RNase Inhibitor、dNTPs、Oligo dT (18T) Primer 与 Random 6 mers Primer。
*2：该溶液不含 Evo M-MLV RTase，其余组分与 5X Evo M-MLV RT Reaction Mix Ver.2 完全相同。

保存与运输
保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋运输
示例一

向 293T Cell Total RNA（分别为 200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg）中分别加入 200 ng 的 Human 基因组 DNA，使用本试剂盒去除基因组 DNA，然后进行反转录实验（方法一：两步法的体系1），并以此 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（Code. AG11701）进行 qPCR 扩增检测 Human 的 Actin 基因。

所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.9987，扩增效率是 101.4%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，200 ng ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例二

使用本试剂盒对 293T cell Total RNA 进行反转录（方法二：All in one），Total RNA 起始量 1 μg~1 pg。以反转录产物 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒（Code. AG11701）进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。

所用定量仪器：ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Systems。结果如下：

结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.9959，扩增效率是 106.7%。
② 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，1 μg ~ 1 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
③ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

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