Evo M-MLV 反转录试剂盒（含去除 gDNA 试剂, 用于 qPCR）

产品货号：AG11705

¥1,400

产品描述

本制品是可以去除 cDNA 中混有的基因组 DNA 再进行 Real-Time RT-PCR 反应的专用试剂。基因组 DNA 会对 cDNA 的定量分析造成影响，本制品使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Clean Reagent，通过 42℃ 2 min 即可除去基因组 DNA。处理后的样品可以直接进行后续反转录反应合成 cDNA，再通过定量 PCR 进行基因分析。 使用本制品合成得到的 cDNA 适用于嵌合法和探针法 qPCR 分析。

产品优势

① 含有基因组 DNA 去除试剂 gDNA Clean Reagent，能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
② 试剂盒中分别配有 OligodT (18T) Primer（50 μM）和 Random 6 mers Primer（400 μM），可根据实际情况选择不同的引物进行反转录，亦可根据需要调整引物浓度。
③ 本产品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

产品组成
组分 规格
gDNA Clean Reagent 100 μl
5X gDNA Clean Buffer 200 μl
Evo M-MLV RTase Enzyme Mix *1 100 μl
5X RTase Reaction Buffer Mix I*2 400 μl
Oligo dT (18T) Primer（50 μM） 100 μl
Random 6 mers Primer（400 μM） 100 μl
RNase free water 1 ml x 2 pc

*1：含有 RNase Inhibitor。
*2：含有 dNTP。

 

保存与运输
保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋
示例一

向小鼠肝脏 Total RNA（分别为 2 μg、200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg）分别加入 200 ng 的小鼠基因组 DNA，使用本试剂盒进行基因组 DNA 去除反应，去除基因组 DNA 后进行反转录实验，并以此 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit（Code. AG11701）进行 qPCR 扩增检测小鼠的 GAPDH 基因。

结果如上图所示：
① 工作曲线 R2=0.996，扩增效率 103.1%。
② 不加 RNA 但添加 gDNA 样品，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③ 本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④ 熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例二

向 293T 细胞 Total RNA（分别为 2 μg、200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg）分别加入 200 ng 的人基因组 DNA，使用本试剂盒进行基因组 DNA 去除反应。并以此 cDNA 为模板，取 2 μl 的 cDNA 原液，用 SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit（Code. AG11701）扩增 GAPDH 基因。

结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.995，扩增效率 103.0%。
②不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

示例三

使用小鼠肝脏 Total RNA为模板，使用本试剂盒进行基因组DNA去除反应以及反转录实验，RNA 起始模板量为 2 μg~2 pg。取 2 μl 的 cDNA 原液，用 Pro Taq HS Premix Probe qPCR Kit（Code. AG11704）采用探针法 qPCR 扩增小鼠 GAPDH 基因。

结果如上图所示：
①工作曲线 R2=0.997，扩增效率为 104.0%；
②本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。

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